目的 探究血小板反应蛋白1(THBS1)基因编辑骨髓间充质干细胞(BMSCs)对变应性鼻炎(AR)小鼠的鼻黏膜屏障功能与炎症反应的影响.方法 分离培养小鼠BMSCs,流式细胞仪测定细胞表面标记物表达,茜素红染色和油红O染色检测细胞成骨与成脂分化能力,鉴定分离的结果;使用含THBS1基因的慢病毒感染BMSCs,荧光显微镜观察细胞内绿色荧光蛋白EGFP表达,并以实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞内THBS1 mRNA和蛋白表达情况,鉴定感染效果.实验分为对照组、模型组、BMSCs组、THBS1-BMSCs组,每组15只,除对照组外的其余3组小鼠均构建AR模型,对照组和模型组小鼠均尾静脉注射0.1 mL PBS,BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠分别尾静脉注射0.1 mL BMSCs、0.1 mL经THBS1基因编辑的BMSCs.处理结束后,对各组小鼠流涕、挠鼻及喷嚏情况进行统计,ELISA法检测血清IFN-γ、IgE、TNF-α、IL-4及IL-6的含量,HE染色和PAS染色观察鼻黏膜病理形态学变化,免疫荧光染色检测鼻黏膜内CK-5与β-tubulin表达情况,Western blot检测鼻黏膜内紧密连接蛋白Claudin-1、Occlu-din的水平.结果 分离的细胞表面CD105、CD90和CD73为阳性表达,CD34和CD45为阴性表达,并具备良好的成骨与成脂分化能力,说明成功分离到BMSCs.经含THBS1基因的慢病毒感染后的BMSCs出现明显绿色荧光蛋白EGFP表达,THBS1 mRNA和蛋白相对表达均上调(P<0.05).与对照组比较,模型组小鼠精神萎靡,伴有连续性喷嚏和挠鼻次数增加(P<0.05),血清IFN-γ含量降低,IgE、TNF-α、IL-4、IL-6含量均升高(P<0.05),鼻黏膜结构受损,有大量嗜酸性粒细胞浸润,且杯状细胞数目也明显增加(P<0.05),CK-5与β-tubulin的荧光强度均减弱(P<0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均下调(P<0.05);与模型组比较,BMSCs组和THBS1-BMSCs组小鼠精神状态有所好转,喷嚏和挠鼻次数减少(P<0.05),血清IFN-γ含量升高,IgE、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P<0.05),鼻黏膜内嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均减少(P<0.05),CK-5与 β-tubulin的荧光强度增强(P<0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达量均上调(P<0.05);与BMSCs组比较,THBS1-BMSCs组小鼠喷嚏和挠鼻次数减少(P<0.05),血清IFN-γ含量升高,IgE、TNF-α、IL-4、IL-6含量均降低(P<0.05),鼻黏膜嗜酸性粒细胞与杯状细胞数目均进一步减少(P<0.05),CK-5与β-tubulin荧光强度显著增强(P<0.05),Claudin-1、Occludin的蛋白相对表达均上调(P<0.05).结论 经THBS1基因编辑的BMSCs可明显增强AR小鼠的鼻黏膜屏障功能,降低炎症反应,从而减轻鼻部症状.

血小板反应蛋白1;骨髓间充质干细胞;变应性鼻炎;鼻黏膜功能;炎症

王丽;黄永阳;张义;綦彬;万龙;杜炎平;陈才盛

黄冈市中心医院耳鼻喉头颈外科,湖北 黄冈438000

局解手术学杂志

[1]王丽;黄永阳;张义;綦彬;万龙;杜炎平;陈才盛-.THBS1基因编辑BMSCs对变应性鼻炎模型小鼠鼻黏膜屏障功能及炎症反应的影响)[J].局解手术学杂志,2022(09):765-773

THBS1,基因编辑,BMSCs,变应性鼻炎,鼻炎模型,模型小鼠,黏膜屏障功能,血小板反应蛋白,骨髓间充质干细胞,分离培养,流式细胞仪,细胞表面,标记物,茜素红,成骨,成脂分化,分化能力,慢病毒感染,荧光显微镜观察,绿色荧光蛋白,EGFP,blot,尾静脉注射,PBS,流涕,喷嚏,IFN,IgE,HE,PAS,病理形态学,免疫荧光染色,黏膜内,tubulin,紧密连接蛋白,Claudin,CD105,CD90,CD73,阳性表达,CD34,CD45,功分,白相,萎靡,含量降低,膜结构,嗜酸性粒细胞,细胞浸润,杯状细胞,荧光强度,Occludin,精神状态,相对表达量,明显增强,鼻部症状,鼻黏膜功能

0.192904