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节律基因隐花色素2在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及机制研究
文献摘要：
目的:探讨节律基因隐花色素2（CRY2）在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及其机制。方法:咪喹莫特诱导小鼠模型实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为咪喹莫特组（连续外用咪喹莫特乳膏5 d诱导构建银屑病小鼠模型，6只）和对照组（不予任何处理，6只），第6天处死小鼠，取其背部皮肤组织，免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达。HaCaT细胞转染实验：使用小干扰RNA（siRNA）技术在HaCaT细胞中敲减CRY2的表达（siRNA-CRY2组），以siRNA-NC组作为对照，5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷（EdU）染色检测HaCaT细胞增殖活力，实时荧光定量PCR（qPCR）检测HaCaT细胞中趋化因子mRNA表达水平，Western印迹检测细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）蛋白的磷酸化水平。肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激动物和细胞实验：12只C57BL/6雌鼠随机均分为TNF-α组（小鼠耳部皮下连续注射TNF-α溶液6 d，6只）和磷酸盐缓冲液（PBS）组（注射等量的PBS，6只），第7天处死小鼠，取其耳部皮肤组织，免疫荧光染色检测表皮中CRY2的表达；用50 ng/ml TNF-α刺激CRY2基因敲减的HaCaT细胞12 h（siRNA-CRY2 + TNF-α组），以siRNA-NC + TNF-α组作为对照，qPCR检测各组细胞中趋化因子mRNA的表达。统计分析采用两独立样本
t检验。
结果:免疫荧光染色显示，咪喹莫特组小鼠背部表皮层中CRY2蛋白的表达（0.94 ± 0.23）显著低于对照组（2.30 ± 0.25，
t = 3.99，
P = 0.016）。HaCaT细胞转染实验：siRNA-CRY2组EdU阳性细胞比例（48.13% ± 10.97%）显著高于siRNA-NC组（38.23% ± 0.81%，
t = 5.00，
P = 0.007），且siRNA-CRY2组趋化因子CXCL1、CXCL8 mRNA相对表达量及p-ERK1/2蛋白相对表达量均显著高于siRNA-NC组（均
P < 0.05），但两组间CCL20 mRNA表达量及ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义（均
P > 0.05）。TNF-α刺激实验：免疫荧光染色显示，TNF-α组鼠耳表皮组织中CRY2蛋白表达水平（0.37 ± 0.34）显著低于PBS组（2.04 ± 0.17，
t = 4.38，
P = 0.012）；siRNA-CRY2 + TNF-α组HaCaT细胞趋化因子CXCL1、CXCL8、CCL20 mRNA相对表达量均显著高于siRNA-NC + TNF-α组（均
P < 0.05）。
结论:CRY2在银屑病小鼠模型中表达降低，促进了角质形成细胞的增殖以及趋化因子CXCL1、CXCL8和CCL20的表达，且TNF-α可能是下调CRY2表达的上游细胞因子。
文献关键词：
银屑病;隐花色素类;昼夜节律;模型，动物;角蛋白细胞;炎症趋化因子类;肿瘤坏死因子α;细胞外信号调节激酶1/2
中图分类号：
作者姓名：
姚玲玲;余增洋;郭春源;周静;崔莲;于倩;虞英媛;周雪;蔡江鲁伊;史玉玲
作者机构：
安徽医科大学上海临床学院，合肥 230000;上海市第十人民医院皮肤科，上海 200072;同济大学附属皮肤病医院皮肤科，上海 200443
文献出处：
引用格式：
[1]姚玲玲;余增洋;郭春源;周静;崔莲;于倩;虞英媛;周雪;蔡江鲁伊;史玉玲-.节律基因隐花色素2在银屑病小鼠模型及HaCaT细胞中的表达变化及机制研究)[J].中华皮肤科杂志,2022(09):759-766
A类：
隐花色素类
B类：
节律基因,银屑病,小鼠模型,HaCaT,表达变化,CRY2,模型实验,C57BL,雌鼠,外用,咪喹莫特乳膏,不予,处死,背部皮肤,皮肤组织,免疫荧光染色,细胞转染,小干扰,siRNA,NC,乙炔基,脱氧,尿嘧啶,EdU,细胞增殖活力,qPCR,细胞外信号调节激酶,ERK1,磷酸化,激动,细胞实验,耳部,磷酸盐缓冲液,PBS,等量,ml,基因敲减,表皮层,阳性细胞,CXCL1,CXCL8,相对表达量,白相,CCL20,蛋白表达水平,细胞趋化,角质形成细胞,细胞的增殖,昼夜节律,角蛋白细胞,炎症趋化因子类
AB值：
0.193411
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