典型文献
干扰素调节因子3引导RNA真核表达载体的构建
文献摘要：
目的 通过构建干扰素调节因子3(IRF3)gRNA真核表达载体,研究IRF3介导的转录非依赖性细胞凋亡的分子机制.方法 通过分析IRF3的分子结构,在CHOPCHOP网站设计IRF3分子gRNA的序列,并在pLenti-U6-gRNA-PGK-Neo表达载体上ClaI和NheI限制性内切酶的位点处设计两对引物,通过重叠延伸PCR法扩增生成IRF3 gRNA的表达模块,通过TA克隆的方法构建到pGM-simpleT克隆载体中,然后用双酶切的方法将IRF3 gRNA的表达模块亚克隆构建到表达载体中,通过PCR和Sanger测序的方法筛选并鉴定pLenti-U6-IRF3-gRNA表达载体.结果 在IRF3的BH3样结构域和C端磷酸化结构域之间获得IRF3的gRNA序列.通过重叠延伸PCR扩增得到IRF3 gRNA的表达模块,通过TA克隆得到克隆载体pGM-simple T-IRF3-gRNA.通过双酶切的方法,将IRF3 gRNA表达模块亚克隆至pLenti-U6-gRNA-PGK-Neo真核表达载体,通过Sanger测序鉴定最终得到pLenti-U6-IRF3-gRNA表达载体.结论 通过重叠延伸法成功构建pLenti-U6-IRF3-gRNA表达载体,为研究IRF3诱导细胞凋亡的转录非依赖性分子机制奠定了基础.
文献关键词：
干扰素调节因子3;重叠延伸PCR;CRISPR-Cas9;引导RNA
中图分类号：
作者姓名：
鞠思雨;侯卓岩;王晰;姜生远;李佳起;吕海菲;刘文;张之勇
作者机构：
250117山东济南,山东第一医科大学临床与基础医学院
文献出处：
引用格式：
[1]鞠思雨;侯卓岩;王晰;姜生远;李佳起;吕海菲;刘文;张之勇-.干扰素调节因子3引导RNA真核表达载体的构建)[J].中华临床实验室管理电子杂志,2022(04):215-221
A类：
ClaI,NheI,pGM,simpleT
B类：
干扰素调节因子,真核表达载体,IRF3,gRNA,非依赖性,分子结构,CHOPCHOP,网站设计,pLenti,U6,PGK,Neo,限制性内切酶,两对,引物,TA,克隆载体,双酶,亚克,Sanger,BH3,结构域,磷酸化,延伸法,CRISPR,Cas9
AB值：
0.203426
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