目的 探讨血清外泌体miR-454在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用机制.方法 纳入我院收治的NSCLC患者40例(NSCLC组),同时选取我院体检中心与之匹配的健康受试者40例(健康对照组),使用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测NSCLC组患者和健康对照组血清外泌体中miR-454、PDK1 mRNA和蛋白的表达.RT-qPCR检测人支气管上皮样细胞(HBE)和A549细胞中miR-454、PDK1 mRNA和蛋白的表达.提取NSCLC患者血清外泌体作为外泌体组,将去除外泌体的血清作为血清组,通过透射电镜鉴定外泌体的形态;Western blot检测外泌体表面标志物HSP70、CD63、CD81蛋白的表达.生物信息学网站预测PDK1与miR-454的靶向关系,并通过双荧光素酶报告基因分析进行验证.将NSCLC细胞A549分为血清外泌体组(于含血清来源的外泌体培养基中培养)和对照组(于去除外泌体的血清中培养),探讨血清外泌体对A549细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的影响.将NC mimic、miR-454 mimic、NC inhibitor、miR-454 inhibitor、miR-454 mimic+Vector、miR-454 mimic+pcDNA-PDK1转染到外泌体中,分别设为NC mimic组、miR-454 mimic组、NC inhibitor组、miR-454 inhibitor组、miR-454+Vector组、miR-454+pcDNA-PDK1组,探讨外泌体miR-454对A549细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响,及外泌体miR-454通过靶向PDK1对NSCLC细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响.结果 透射电镜结果 显示,外泌体形态为典型的脂质双层膜包裹的圆形颗粒.与血清组比较,外泌体组中表面标志物HSP70、CD63和CD81蛋白的表达显著增加(P<0.05).与健康对照组比较,NSCLC组患者血清外泌体中miR-454的表达显著降低,PDK1 mRNA和蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).在A549细胞中,与对照组比较,NSCLC血清来源的外泌体显著促进细胞增殖、迁移和侵袭,抑制细胞凋亡,差异均有统计学意义(P<0.05).与HBE细胞相比,A549细胞中miR-454的表达降低,PDK1 mRNA和蛋白表达水平显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).PDK1是miR-454的靶基因.与NC mimic组比较,miR-454 mimic组中细胞增殖、侵袭及迁移能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,PDK1 mRNA和蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与NC inhibitor组比较,miR-454 inhibitor组细胞中miR-454的表达显著降低(P<0.05),PDK1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05).与miR-454+Vector组比较,miR-454+pcDNA-PDK1组细胞增殖、侵袭和迁移能力增强,细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 血清外泌体miR-454通过调控靶基因PDK1抑制NSCLC的进展,提示血清外泌体miR-454有可能作为诊断NSCLC的生物标志物.

外泌体;miR-454;PDK1;非小细胞肺癌

董晓平;刘红岗;张勇

空军军医大学第二附属医院胸腔外科,陕西 西安710038

局解手术学杂志

[1]董晓平;刘红岗;张勇-.血清外泌体miR-454通过下调PDK1调控非小细胞肺癌的发生发展)[J].局解手术学杂志,2022(10):849-856

454+Vector,454+pcDNA

血清外泌体,miR,PDK1,非小细胞肺癌,NSCLC,我院,体检中心,健康受试者,实时定量聚合酶链反应,qPCR,blot,人支气管上皮样细胞,HBE,A549,除外,过透,透射电镜,镜鉴,表面标志物,HSP70,CD63,CD81,双荧光素酶报告基因,报告基因分析,含血,NC,inhibitor,mimic+Vector,mimic+pcDNA,转染,双层膜,蛋白表达水平,迁移和侵袭,迁移能力,细胞凋亡率,侵袭和迁移,调控靶基因,生物标志物

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