目的:研究地塞米松(Dex)对水通道蛋白2(AQP2)的体外直接调控效应,明确该作用是否依赖于PKA信号通路.方法:制备AQP2野生型及突变型质粒,突变型质粒通过突变AQP2 C末端4个PKA磷酸化位点(S256、S261、S264和S269)阻断PKA信号通路.AQP2野生型及突变型质粒分别转染HEK293细胞和显微注射爪蟾卵母细胞,再予共转染PKA质粒或Dex 0.1 μmol/L干预,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测AQP2总蛋白表达,通过细胞表面生物素化评估AQP2膜蛋白表达,比较各组爪蟾卵母细胞的水渗透性差别.结果:Dex及PKA均显著上调HEK293细胞的AQP2膜蛋白及总蛋白表达(均P＜0.01);与野生型相比,PKA磷酸化位点的突变显著抑制了体外PKA直接诱导的AQP2磷酸化;突变后AQP2的膜蛋白及总蛋白表达均显著下调(均P＜0.01);PKA磷酸化位点突变后,Dex及PKA对AQP2膜蛋白及总蛋白表达的上调效应均被显著抑制(均P＜0.01);Dex及PKA均显著增加爪蟾卵母细胞水通透活性,PKA磷酸化位点突变后,该效应被显著抑制(均P＜0.01).结论:Dex对AQP2的总蛋白及膜蛋白表达具有显著的上调效应,该作用依赖于PKA信号通路实现.

水通道蛋白2;地塞米松;蛋白激酶A;磷酸化;信号通路

朱玲丽;杨建环;王德选;陈敏广

温州医科大学附属第二医院育英儿童医院 儿童肾内科 温州市儿童泌尿生殖系统疾病重点实验室,浙江温州 325027

温州医科大学学报

[1]朱玲丽;杨建环;王德选;陈敏广-.地塞米松通过PKA信号通路调控水通道蛋白2的分子机制)[J].温州医科大学学报,2022(03):186-193

S261,S264,S269

地塞米松,PKA,控水,水通道蛋白,Dex,AQP2,调控效应,野生型,突变型,质粒,磷酸化,S256,HEK293,显微注射,卵母细胞,共转染,蛋白质印迹,blot,总蛋白,过细,细胞表面,面生,生物素化,膜蛋白,水渗透性,白及,位点突变,通透,蛋白激酶

0.19259