典型文献
流感病毒诱导的小鼠肺上皮细胞损伤及外泌体miRNA差异表达谱研究
文献摘要：
目的:通过研究甲型流感病毒刺激后小鼠肺上皮细胞源性外泌体的微小RNA(miRNA)差异表达谱,探讨流感病毒诱导肺上皮细胞损伤的机制.方法:采用甲型流感病毒(MOI=0.2)诱导小鼠肺上皮MLE-12细胞,同时设空白对照组,通过CCK-8法检测不同诱导时间下的细胞活力,明确甲型流感病毒诱导细胞损伤的最佳条件.通过流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-qPCR和Western blot检测炎症反应相关因子的表达水平.采用超速离心法提取甲型流感病毒诱导的MLE-12细胞上清液中的外泌体,并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot及高通量单细胞测序检测外泌体形态、粒径、浓度、膜标志蛋白表达及其miRNA差异表达谱.结果:CCK-8实验结果显示,MOI=0.2的甲型流感病毒干预8 h的MLE-12细胞活力抑制率最为符合本研究需要.以该条件干预细胞,凋亡率(24.11％±0.17％)显著升高;甲型流感病毒核蛋白(NP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA和蛋白表达水平均显著升高.透射电镜观察到提取的外泌体为圆形的囊泡状;纳米颗粒跟踪分析检测到甲型流感病毒感染的细胞上清液中外泌体的粒径分布发生明显改变;Western blot检测到外泌体膜标志蛋白(CD63、CD81和TSG101)的表达.细胞测序结果共检测出154个差异表达的miRNAs,其中82个呈上调趋势,72个呈下调趋势;挑选出10个进行RT-qPCR验证,有6个与测序结果一致.结论:流感病毒诱导小鼠肺上皮细胞损伤的机制可能与外泌体特异性miRNA有关.
文献关键词：
肺上皮细胞;甲型流感病毒;外泌体;微小RNA;高通量单细胞测序
中图分类号：
作者姓名：
马心悦;朱梦晨;卢芳国;陈雨露;王平;赵澄;黄家望;李玲
作者机构：
湖南中医药大学 中西医结合学院,湖南长沙410208;湖南中医药大学医学院,湖南长沙410208;湖南中医药大学中医学院,湖南长沙410208
文献出处：
引用格式：
[1]马心悦;朱梦晨;卢芳国;陈雨露;王平;赵澄;黄家望;李玲-.流感病毒诱导的小鼠肺上皮细胞损伤及外泌体miRNA差异表达谱研究)[J].中国病理生理杂志,2022(01):40-49
A类：
高通量单细胞测序
B类：
病毒诱导,小鼠肺上皮细胞,细胞损伤,伤及,外泌体,差异表达,表达谱,甲型流感病毒,毒刺,MOI,MLE,空白对照,CCK,诱导时间,细胞活力,最佳条件,过流,流式细胞术,qPCR,blot,相关因子,超速离心法,上清液,过透,透射电镜,纳米颗粒,跟踪分析,抑制率,该条,凋亡率,核蛋白,NP,蛋白表达水平,电镜观察,囊泡,泡状,分析检测,流感病毒感染,粒径分布,CD63,CD81,TSG101,miRNAs,挑选出
AB值：
0.205014
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