目的:检测巨噬细胞RAW264.7对H1N1型流感病毒增殖的抑制作用,初步探讨固有免疫细胞抗病毒的作用机制.方法:采用10 TCID50、100 TCID50和1000 TCID50低、中、高剂量流感病毒A/PR/8/34(PR8,H1N1)感染RAW264.7细胞,光学显微镜和Hoechst染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测RAW264.7细胞凋亡率,qPCR和流式细胞术检测Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平,免疫荧光染色对细胞Influenza NP、TLR4和NF-κB p65表达进行定位,qPCR和ELISA检测IL-6、TNF-α和IFN-β水平.结果:与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组细胞凋亡率显著提高(P<0.01);qPCR、流式细胞术和免疫荧光染色显示,与对照组比较,RAW264.7细胞感染PR8后Influenza NP、TLR4和NF-κB p65水平显著提高(P<0.01),与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组三者表达不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID50组TLR4和NF-κB p65上调幅度大于100 TCID50组(P<0.05);细胞感染PR8后IL-6、TNF-α和IFN-βmRNA水平和培养液各因子浓度较对照组显著升高(P<0.01),与10 TCID50组比较,100 TCID50组和1000 TCID50组各因子水平不同程度升高(P<0.05),且1000 TCID50组较100 TCID50组显著升高(P<0.01).感染剂量与细胞凋亡率(FCM)和NP(FCM)、TLR4(FCM)、NF-κB p65(FCM)、IL-6、TNF-α和IFN-β(qPCR)水平呈正相关(r=0.634,P=0.002;r=0.747,P<0.001;r=0.812,P<0.001;r=0.790,P<0.001;r=0.805,P<0.001;r=0.874,P<0.001;r=0.863,P<0.001).结论:巨噬细胞RAW264.7通过上调TLR4-NF-κB信号通路诱导下游炎症因子表达,发挥抗病毒增殖效应.

RAW264.7;流感病毒;固有免疫;TLR4;NF-κB

田晶;隋海娟;陈月

锦州医科大学,锦州121000

中国免疫学杂志

[1]田晶;隋海娟;陈月-.巨噬细胞RAW264.7通过TLR4-NF-κB信号通路调控流感病毒A/PR/8/34(H1N1)增殖的实验研究)[J].中国免疫学杂志,2022(13):1557-1563

巨噬细胞,RAW264,TLR4,控流,流感病毒,H1N1,病毒增殖,固有免疫细胞,抗病毒,TCID50,高剂量,PR8,光学显微镜,Hoechst,细胞形态,形态变化,流式细胞术,细胞凋亡率,qPCR,Influenza,NP,p65,免疫荧光染色,IFN,细胞感染,调幅,培养液,感染剂量,FCM

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