目的:探究RNA结合蛋白Rbm38在小鼠造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)发育中的作用.方法:分析造血干细胞发育过程中连续群体的单细胞转录组数据,筛选生血内皮细胞(hemogenic endothelial cell,HEC)和/或造血干细胞前体(hematopoietic stem cell precursor,pre-HSC)阶段表达上调的RNA结合蛋白分子(RNA binding protein,RBP);利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠模型,将杂合型小鼠交配获得实验用胚胎,按照小鼠胚胎基因型不同将实验分为实验组和对照组,实验组为Rbm38-/-基因型胚胎,对照组为Rbm38+/+和Rbm38+/-基因型胚胎;取材胚胎期11.5 d(embryonic day 11.5,E11.5)孕鼠胚胎的卵黄囊(yolk sac,YS),行体外造血细胞集落形成实验(colony forming unit-culture,CFU-C)检测主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-mesonephros,AGM)区和卵黄囊生成造血祖细胞(hematopoietic progenitor cell,HPC)的能力,行小鼠胚胎AGM区移植实验评价AGM区产生功能性造血干细胞的能力.结果:(1)Rbm38在动脉内皮细胞(arterial endothelial cell,AEC)向生血内皮细胞和Ⅰ型造血干细胞前体(type 1 pre-hematopoietic stem cell,T1 pre-HSC)的转化过程中表达明显上调,且在后续造血干细胞成熟的过程中维持高水平表达;(2)实验组和对照组E11.5小鼠胚胎AGM区和卵黄囊生成造血祖细胞数量以及其分化功能无统计学差异(P>0.05);(3)实验组和对照组移植后外周血嵌合率无统计学差异(P>0.05).结论:(1)多种RNA结合蛋白分子,如Rbm38,在小鼠生血内皮细胞与Ⅰ型造血干细胞前体阶段特异性高表达;(2)敲除Rbm38不影响小鼠胚胎AGM区和卵黄囊生成造血祖细胞的能力;(3)敲除Rbm38不影响小鼠胚胎AGM区产生功能性的造血干细胞.

Rbm38;造血发育;造血干细胞;主动脉-性腺-中肾区

吴知晓;宁小伟;赵海鑫;周杰;柳迪;刘兵;兰雨

暨南大学基础医学与公共卫生学院血液学研究所,广东广州510632;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院,北京100850;解放军总医院第五医学中心,北京100071;北京大学生命科学中心,北京100871

中国病理生理杂志

[1]吴知晓;宁小伟;赵海鑫;周杰;柳迪;刘兵;兰雨-.RNA结合蛋白Rbm38在小鼠胚胎造血发育中的功能研究)[J].中国病理生理杂志,2022(05):876-883

Rbm38,造血发育,hemogenic,Rbm38+,mesonephros

结合蛋白,小鼠胚胎,功能研究,造血干细胞,hematopoietic,stem,cell,HSC,细胞发育,单细胞转录组,转录组数据,内皮细胞,endothelial,HEC,precursor,binding,protein,RBP,CRISPR,Cas9,技术构建,基因敲除小鼠模型,杂合,交配,基因型,取材,胚胎期,embryonic,day,E11,孕鼠,卵黄囊,yolk,sac,YS,造血细胞,集落形成,colony,forming,unit,culture,CFU,主动脉,性腺,aorta,gonad,AGM,造血祖细胞,progenitor,HPC,实验评价,区产,arterial,AEC,type,转化过程,细胞成熟,细胞数量,分化功能,统计学差异,嵌合,肾区

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