典型文献
基于CRISPR/Cas9技术构建Plcz1基因敲除小鼠模型
文献摘要：
目的 利用CRISPR/Cas9系统构建精子特异性磷脂酶C zeta-1(phospholipase C zeta1,Plcz1)基因敲除(Plcz1-/-)小鼠模型,探讨Plcz1基因在雄性小鼠生育过程中的作用.方法 选择小鼠Plcz1基因第6、7外显子作为靶位点,前后两个位点设计2对sgRNA序列,再将2对sgRNA以Golden Gate方法插入pX330A质粒中,构建pX330-sgRNA重组质粒.经扩增、纯化后,将重组质粒显微注射进小鼠受精卵原核中,进行胚胎移植至代孕母鼠,F0代小鼠出生后,提取其尾DNA进行PCR鉴定和DNA测序分析.通过F0代与野生型小鼠交配得到F1代小鼠,F1代交配繁殖至F2代获得Plcz1基因缺失的小鼠纯合品系,Plcz1-/-与野生型小鼠交配,分析Plcz1-/-雄鼠的生育能力.结果 成功构建pX330-sgRNA重组质粒,通过繁育和测序筛选获得3只Plcz1-/-雄鼠(Plcz1m3、Plcz1m4、Plcz1m5),对3只小鼠进行目的基因测序发现:(1)Plcz1m3:Plcz1基因第6、7外显子区域缺失3078 bp;(2)Plcz1m4:第7外显子区域缺失7 bp,该小鼠在饲养过程中死亡;(3)Plcz1m5:Plcz1基因第6外显子区域缺失1 bp.结论 利用CRISPR/Cas9,成功获得Plcz1-/-雄性小鼠,Plcz1-/-雄性小鼠可育,但与野生型小鼠相比,其生育能力明显下降.
文献关键词：
Plcz1;CRISPR/Cas9;序列测定;基因敲除;小鼠
中图分类号：
作者姓名：
曹彬彬;蔡瑶;王宝珠;饶喻;王超;苟克勉;王涛
作者机构：
扬州大学兽医学院,江苏 扬州 225009;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏 扬州 225009
文献出处：
引用格式：
[1]曹彬彬;蔡瑶;王宝珠;饶喻;王超;苟克勉;王涛-.基于CRISPR/Cas9技术构建Plcz1基因敲除小鼠模型)[J].中国比较医学杂志,2022(07):101-108
A类：
Plcz1,zeta1,pX330A,Plcz1m3,Plcz1m4,Plcz1m5
B类：
CRISPR,Cas9,技术构建,基因敲除小鼠模型,系统构建,精子,磷脂酶,phospholipase,雄性小鼠,外显子,靶位,个位,sgRNA,Golden,Gate,重组质粒,显微注射,射进,受精卵,原核,胚胎移植,代孕,孕母,母鼠,F0,出生后,测序分析,野生型,交配,配得,代交,F2,基因缺失,品系,雄鼠,生育能力,繁育,目的基因,基因测序,子区域,bp,饲养,序列测定
AB值：
0.251885
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