典型文献
siRNA-881干扰GLS基因对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响
文献摘要：
为探究旋毛虫肌幼虫中是否存在谷氨酰胺依赖性抗酸机制(AR4),本研究根据GenBank中旋毛虫肌幼虫谷氨酰胺酶(TsGLS)基因序列设计3条特异性siRNA分子,并通过浸泡法分别导入旋毛虫肌幼虫体内,利用荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及间接免疫荧光试验(IFA),筛选沉默效果最佳的siRNA分子,并确定其最佳转染条件,结果显示,siRNA-881为基因沉默最佳的siRNA分子,且转染12 h、2μmol/L浓度、培养3d为最佳基因沉默条件.在不同的酸性条件下培养并检测转染siRNA后旋毛虫肌幼虫的存活率,进一步将转染siRNA-881的旋毛虫肌幼虫接种小鼠,分析TsGLS基因沉默对减虫率、保姆细胞壁厚度及子代肌幼虫基因转录水平的影响.转染siRNA-881后旋毛虫肌幼虫的存活率结果显示,在pH 2.5培养2 h时的存活率明显低于其他酸性环境下;转染siRNA-881的旋毛虫肌幼虫接种小鼠后7 d旋毛虫成虫减虫率和35 d旋毛虫肌幼虫减虫率分别为61.64％和66.71％;将保姆细胞壁厚度与PBS对照组比较,siRNA-881组(15.90±1.301)保姆细胞壁厚度降低了 39.78％;siRNA-881转染旋毛虫肌幼虫后,子一代肌幼虫TsGLS基因的转录水平较亲代相比降低30.30％.以上结果表明,旋毛虫具有类似于大肠杆菌中存在的谷氨酰胺依赖性抗酸系统(AR4),抑制旋毛虫TsGLS基因表达可明显降低旋毛虫肌幼虫抗酸能力.本研究首次证实通过RNA干扰技术可有效抑制旋毛虫肌幼虫TsGLS基因的表达,使该虫的抗酸能力减弱,且在宿主肠道的定植能力下降,该结果为研究旋毛虫的致病机制及其感染的防治提供新思路.
文献关键词：
旋毛虫肌幼虫;谷氨酰胺酶;RNA干扰;抗酸
中图分类号：
作者姓名：
孟诗;张妍;杨啸;赵亚;高远;王爽;刁子洋;郭琨;宋铭忻
作者机构：
东北农业大学动物源性人兽共患病黑龙江省重点实验室,黑龙江 哈尔滨 150030
文献出处：
引用格式：
[1]孟诗;张妍;杨啸;赵亚;高远;王爽;刁子洋;郭琨;宋铭忻-.siRNA-881干扰GLS基因对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响)[J].中国预防兽医学报,2022(01):73-79
A类：
AR4,TsGLS
B类：
siRNA,旋毛虫肌幼虫,抗酸,究根,GenBank,谷氨酰胺酶,基因序列,序列设计,浸泡法,虫体,qPCR,western,blot,间接免疫荧光试验,IFA,转染,基因沉默,3d,酸性条件,保姆,细胞壁,壁厚,子代,基因转录水平,酸性环境,成虫,PBS,子一代,亲代,比降,大肠杆菌,酸系,干扰技术,宿主,定植,致病机制
AB值：
0.151465
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