目的 观察Smad3对胰腺癌细胞Panc-1、BxPC-3凋亡、自噬的影响,初步探讨Smad3表达水平影响胰腺癌进程的可能机制.方法 基于GEPIA2数据库进行生物信息学分析,探究Smad3与胰腺癌发生、发展及生存的相关性.利用CRISPR/Cas9系统以及短发卡RNA(ShRNA)敲除及敲减Smad3 的表达,采用 Real-Time quantitative PCR(qPCR)和Western blot检测细胞中Smad3 mRNA和蛋白水平变化.实验组转入ShSmad3-1、ShSmad3-2序列,将不靶向任何基因的Sh-Scramble序列作为对照组(Scr).将转入Smad3 guide RNA(gRNA)序列作为CRISPR/Cas9的实验组,转入空载质粒的作为CRISPR/Cas9的对照组.采用Western blot检测细胞中LC3、p62、p38以及p-p38蛋白变化情况,同时在敲减Smad3的胰腺癌细胞用PI-Annexin V试剂盒染色并进行流式分析.利用pLVX-Smad3质粒进行回补实验,并用p38抑制剂SB203580处理细胞检测相关蛋白的变化情况.结果 GEPIA2数据库及临床标本分析结果显示,Smad3在胰腺癌组织中高表达(P＜0.05).在胰腺癌细胞BxPC-3中转入ShSmad3-1、ShSmad3-2后,Smad3的mRNA和蛋白水平均显著降低(P＜0.05).同时在Panc-1中转入Smad3 guide RNA筛选到2个Smad3敲除细胞系.与对照组相比,敲减Smad3胰腺癌细胞凋亡显著增加(P＜0.05).Western blot实验发现:Smad3敲减及敲除后,p-p38的蛋白水平显著增加(P＜0.05),LC3、p62水平显著降低(P＜0.05).进一步通过回补实验及利用SB203580处理胰腺癌细胞,发现p62、LC3蛋白水平能回复(P＜0.01).结论 干扰Smad3促进胰腺癌细胞过度自噬,进而导致细胞凋亡增加,可能与激活p38/MAPK信号通路有关.

Smad3;胰腺癌;细胞凋亡;自噬

710021西安,西安医学院临床医学院中尼友好拉吉姆医学实验室;西安,西安医学院第一附属医院妇产科

[1]张旭东;刘浩昂;王志浩;兰凯;陈蕊;李凯;刘树义;Rajiv Kumar JHA-.Smad3通过p38/MAPK信号通路调控细胞自噬及凋亡促进胰腺癌进程)[J].陆军军医大学学报,2022(19):1968-1978

ShSmad3

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