典型文献
补体因子H关键结构域野生型及突变型克隆载体的构建表达与功能初探
文献摘要：
目的 构建并表达补体因子H(complement factor H,CFH)关键结构域蛋白,即野生型短同源重复序列(short consensus repeats,SCR)7和SCR19-20,突变型SCR7 Y402H、SCR19-20 R1210C、SCR19-20 R1215Q,探讨CFH基因突变导致补体过度激活疾病的可能机制.方法 采用In-Fusion反应,将编码SCR7(386～446位氨基酸)和SCR19-20(1107～1231位氨基酸)的cDNA序列分别克隆入pET-47b(+)载体,定点突变引入3个预期突变位点Y402H、R1210C和R1215Q,再将携带pET-47b(+)载体6-His纯化标签的CFH-SCR7和CFH-SCR19-20野生型和突变型重组质粒导入穿梭载体pNCMO2,在短芽孢杆菌中进行上述蛋白结构域的表达、Ni-NTA树脂纯化、SDS-PAGE电泳和蛋白质印迹法鉴定.通过检测其与肝素的亲和能力初步鉴定野生型与突变型的功能差异.结果 成功构建了CFH关键结构域SCR7和SCR19-20的野生型和突变型重组表达载体pNCMO2-SCR7、pNCMO2-SCR19-20、pNCMO2-SCR7 Y402H、pNCMO2-SCR19-20 R1210C、pNCMO2-SCR19-20 R1215Q.5种重组体均高效表达且经抗6-His抗体和特异性抗CFH单克隆抗体进行蛋白质印迹法实验验证均为相应正确蛋白.SCR7 Y402H比野生型的肝素亲和力强,R1210C和R1215Q均比SCR19-20野生型亲和力弱.结论 成功构建并表达了CFH SCR7和SCR19-20突变体,初步鉴定了突变蛋白结构域的功能,为体外进一步研究CFH基因突变致补体过度激活类疾病发生的可能机制奠定了实验基础.
文献关键词：
补体因子H;短同源重复序列;克隆;蛋白表达
中图分类号：
作者姓名：
范新萍;林雅军;刘璞;岳育红
作者机构：
首都医科大学附属北京朝阳医院检验科,北京 100020;北京医院国家老年医学中心国家卫生健康委北京老年医学研究所国家卫生健康委老年医学重点实验室中国医学科学院老年医学研究院,北京 100730
文献出处：
引用格式：
[1]范新萍;林雅军;刘璞;岳育红-.补体因子H关键结构域野生型及突变型克隆载体的构建表达与功能初探)[J].中国医学前沿杂志（电子版）,2022(05):6-14
A类：
短同源重复序列,SCR19,SCR7,Y402H,R1210C,R1215Q,47b,pNCMO2
B类：
补体因子,野生型,突变型,克隆载体,建表,complement,CFH,short,consensus,repeats,基因突变,可能机制,In,Fusion,cDNA,别克,pET,定点突变,突变位点,His,纯化标签,重组质粒,穿梭,芽孢杆菌,蛋白结构域,NTA,树脂纯化,SDS,PAGE,电泳,蛋白质印迹法,肝素,功能差异,重组表达,表达载体,重组体,高效表达,单克隆抗体,亲和力,突变体,突变蛋白,疾病发生
AB值：
0.196774
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