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血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建
文献摘要：
目的 构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒,并探究泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5(UBR5)在调控血管生成方面的生物学功能.方法 以人乳腺癌细胞(MCF7)的互补DNA(cDNA)为模板,将UBR5基因编码区序列分为前后两段,经聚合酶链式反应(PCR)扩增.两段扩增序列插入到真核表达载体pCDH-Myc中,通过菌液PCR及DNA测序鉴定插入片段.将重组质粒瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293T)中,通过蛋白质印迹法检测Myc-UBR5蛋白的表达.为了验证UBR5蛋白的功能,通过免疫共沉淀实验检测UBR5与先天性角化不良1(DKC1)蛋白的相互作用.结果 成功构建pCDH-Myc-UBR5重组质粒.经菌液PCR及DNA测序证实UBR5扩增序列成功插入到pCDH-Myc载体中,并在HEK293T中表达.免疫共沉淀实验发现UBR5与DKC1存在相互作用.结论 通过分子克隆技术可成功构建pCDH-Myc-UBR5质粒并在细胞中正确表达.UBR5与血管生成调控蛋白DKC1存在相互作用.
文献关键词：
泛素蛋白连接酶E3组分N-识别蛋白5;重组质粒;分子克隆;先天性角化不良1蛋白;血管生成
中图分类号：
作者姓名：
赵海静;刘琪;金蕊;程龙;刘昱圻;陈韵岱
作者机构：
解放军医学院,北京100853;中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生物工程研究所,北京 100071;中国人民解放军总医院第六医学中心心血管病医学部,北京100048
文献出处：
引用格式：
[1]赵海静;刘琪;金蕊;程龙;刘昱圻;陈韵岱-.血管内皮功能调节酶pCDH-Myc-UBR5分子克隆的构建)[J].中华老年多器官疾病杂志,2022(05):361-365
A类：
UBR5
B类：
血管内皮功能,功能调节,pCDH,Myc,分子克隆,重组质粒,泛素,连接酶,E3,识别蛋白,血管生成,生物学功能,人乳腺癌细胞,MCF7,cDNA,基因编码,编码区,两段,聚合酶链式反应,真核表达载体,菌液,转染,人胚胎,肾细胞,HEK293T,蛋白质印迹法,免疫共沉淀,实验检测,先天性,角化,DKC1,列成,克隆技术,中正,调控蛋白
AB值：
0.244159
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