目的 通过转录组测序筛选雌性与雄性C57BL/6J小鼠差异基因及通路,为进一步探讨小鼠雌雄间行为学差异的分子机制奠定基础.方法 C57BL/6J品系的8周龄雌性与雄性小鼠,完整分离小鼠海马体组织,提取总RN A后逆转录构建cDNA文库,并在华大基因平台上生成单端为50个碱基的读数进行转录组测序.测序结束后基于GO和KE GG数据库,结合R语言中的phyper函数对数据进行筛选、校正和富集分析,计算P值;然后对P值进行矫正得到Q值并基于超几何测试方法对带注释的不同基因表达情况进行了分析,筛选出不同性别小鼠海马体中的差异基因及通路.测序结束后,使用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证在雌雄小鼠海马中筛选出的差异基因并比较差异基因在不同信号通路上的表达情况.结果 通过雌雄差异比较,筛选出325个差异基因,其中上调基因233个,下调基因92个,这些差异基因功能主要富集于长时程增强(LTP)、钙离子信号通路、尼古丁成瘾等过程;雌雄差异基因相互作用网络共有362个连接点和1703个相互作用边,筛选出的10个核心基因分别为:赖氨酸脱甲基酶5 D(Kdm5d)、细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdkl5)、细胞输出介质(Cle1)、多巴胺受体6a3(Slc6a3)、盒式转录因子(Fox)、前体mRNA加工因子4B(Prpf4b)、甘氨酸受体4(Glur4)、钙离子受体2(Camk2)、DNA和RNA结合蛋白家族(Son)、5-羟色胺受体5b(Htr5b).RT-qPCR验证结果与测序结果一致.结论 从雌雄小鼠海马体中筛选出差异基因为研究不同性别小鼠行为学差异提供实验思路并为后续小鼠行为学研究做出针对性实验设计.

转录组测序;行为学差异;C57BL/6J小鼠;雌雄差异

李昱昊;李艳玲;尹雪莉;孙晓梅;张军;李名聪;刘莉;张素梅;张胜权

安徽医科大学生物化学与分子生物学教研室,合肥 230032;合肥市第二人民医院病理科,合肥 230012;安徽医科大学科研实验中心,合肥 230032

安徽医科大学学报

[1]李昱昊;李艳玲;尹雪莉;孙晓梅;张军;李名聪;刘莉;张素梅;张胜权-.基于转录组测序筛选不同性别C57BL/6J小鼠差异基因及通路)[J].安徽医科大学学报,2022(05):742-747

phyper,Kdm5d,Cdkl5,输出介质,Cle1,6a3,Slc6a3,Prpf4b,Glur4,Camk2,Htr5b

转录组测序,C57BL,6J,差异基因,雌性,行为学差异,品系,周龄,雄性小鼠,整分,小鼠海马,海马体,逆转录,cDNA,文库,华大基因,上生,成单,单端,碱基,读数,KE,GG,言中,富集分析,qPCR,雌雄差异,差异比较,基因功能,长时程增强,LTP,钙离子信号通路,尼古丁成瘾,相互作用网络,连接点,核心基因,赖氨酸,脱甲基,细胞周期蛋白依赖性激酶,多巴胺受体,盒式,Fox,加工因子,4B,甘氨酸,结合蛋白,白家,Son,羟色胺,出差,实验思路,行为学研究,实验设计

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