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PTG重组腺病毒过表达载体的构建
文献摘要：
目的 构建及鉴定携带小鼠PTG基因(NM_016854)的过表达重组腺病毒载体,为深入研究PTG的功能奠定基础.方法 化学合成小鼠PTG基因的编码序列,经聚合酶链式反应(PCR)扩增、酶切,后插入GV314载体(CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP),得到重组穿梭质粒pGV314-PTG;进一步BamHⅠ/AgeⅠ双酶切,产物交换入线性化表达载体pDC315,构建重组腺病毒Ad-PTG,将其转染HEK293T细胞包装成重组病毒颗粒,经在HEK293T细胞反复扩增数代后,进行纯化及滴度检测,最后利用PCR、Western blot及测序验证重组腺病毒.结果 经PCR、Western blot及测序后,结果显示成功构建pGV314-CMV-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-PTG过表达腺病毒载体(Ad-PTG),终点稀释法测得病毒滴度为4×1010 PFU/ml,Western blot和荧光定量PCR显示PTG的蛋白和mRNA表达水平显著升高.结论 成功构建携带小鼠PTG基因的重组过表达腺病毒载体,且能有效上调肝细胞中PTG基因的表达.
文献关键词：
PTG;重组腺病毒载体;同源重组;2型糖尿病
中图分类号：
作者姓名：
王晨玺;邓霞;赵志聪;蔡珍生;张盼盼;李莲;李昊翔;赵丽;王东;杨玲;袁国跃
作者机构：
江苏大学附属医院内分泌科,镇江 212001
文献出处：
引用格式：
[1]王晨玺;邓霞;赵志聪;蔡珍生;张盼盼;李莲;李昊翔;赵丽;王东;杨玲;袁国跃-.PTG重组腺病毒过表达载体的构建)[J].安徽医科大学学报,2022(04):558-563
A类：
GV314,3FLAG,pGV314,pDC315
B类：
PTG,过表达载体,NM,重组腺病毒载体,化学合成,编码序列,聚合酶链式反应,CMV,MCS,SV40,EGFP,穿梭,质粒,BamH,Age,双酶,换入,线性化,Ad,转染,HEK293T,装成,重组病毒,病毒颗,数代,blot,稀释法,得病,病毒滴度,PFU,ml,组过,调肝,肝细胞,同源重组
AB值：
0.278692
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