目的 探讨甲醛对人嗜酸性粒细胞(EOL-1)的急性损伤作用及相关机制.方法 体外培养EOL-1细胞,将甲醛室温处理2 h的EOL-1细胞设置为0 mmol组、5 mmol组、10 mmol组、25 mmol组及50 mmol组;同时将3种活性氧(ROS)通路抑制剂(NADPH氧化酶抑制剂DPI、细胞透性超氧化物清除剂Tiron、谷胱甘肽稳定前体NAC)和25 mmol甲醛共同处理后的细胞设置为对照组、甲醛组、甲醛+DPI组、甲醛+Trion组和甲醛+NAC组;依据NAC浓度的不同,设置为对照组、甲醛组、甲醛+0.01 mmol NAC组、甲醛+0.1 mmol NAC组和甲醛+1 mmol NAC组.采用碘化丙啶(PI)和Hoechst荧光染色法检测各组细胞凋亡和死亡的表达,采用罗丹明123(Rho-123)荧光标记法检测细胞线粒体功能损伤,采用Western blotting法检测损伤信号通路蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果 不同浓度甲醛组(0、5、10、25、50 mmol)细胞死亡率分别为(3.313±2.395)％、(8.205±5.719)％、(20.335±5.167)％、(19.387±6.056)％、(28.043±8.851)％,与0 mmol组比较,5 mmol组细胞凋亡和死亡无增加(P=1.00),但是10 mmol组(P=0.030)、25 mmol组(P=0.033)和50 mmol组(P=0.001)甲醛处理细胞死亡显著增加,其半数效应浓度EC50=25 mmol;甲醛组、甲醛+DPI组、甲醛+Trion组、甲醛+NAC组细胞死亡率分别为(61.430±9.885)％、(57.907±13.619)％、(55.700±18.487)％、(21.837±6.674)％,与甲醛组比较,甲醛+DPI组(P=1.00)、甲醛+Trion组(P=1.00)对甲醛诱导的细胞损伤无影响,但是甲醛+NAC组逆转甲醛诱导的细胞死亡(P=0.01);与甲醛组(52.853±11.338)％对比,随着NAC浓度的不同,细胞死亡率不同[甲醛+0.01 mmol NAC组(10.620±4.483)％,甲醛+0.1 mmol NAC组(6.257±6.265)％,甲醛+1 mmol NAC组(4.002±2.50)％],NAC对甲醛诱导的细胞死亡呈浓度依赖性的逆转作用.Rho-123荧光标记结果显示,与0 mmol组相比,10 mmol组、25 mmol组、50 mmol组可以降低线粒体功能(P<0.001),而甲醛+NAC组逆转甲醛诱导的线粒体功能损伤(809.339±163.210 vs 675.552±126.993,P=0.021).Western blotting结果显示,与对照组比较,甲醛25 mmol组能下调Bcl-2蛋白表达(0.401±0.122,P<0.001),上调Bax蛋白表达(2.937±1.388,P=0.006),甲醛+NAC组可明显减轻甲醛诱导的Bax蛋白的表达上调(1.196±0.597,P=0.018)和Bcl-2蛋白的表达下调(0.717±0.246,P=0.018).结论 甲醛≥10mmol通过抑制线粒体功能和调控Bcl-2/Bax信号通路诱导嗜酸性粒细胞EOL-1的损伤,而抗氧化剂NAC可减轻甲醛对EOL-1细胞的损伤及其信号通路.

甲醛;EOL-1细胞;细胞死亡;线粒体功能;信号通路

李娜;郭增丽;迟令懿;杨立卓;马志勇;付志婕

山东大学齐鲁医院心内科 教育部和国家卫健委心血管重构与功能研究重点实验室,山东 济南250012;山东第一医科大学第一附属医院耳鼻咽喉科,山东 济南250014;山东大学齐鲁医院神经外科,山东 济南250012

山东大学学报（医学版）

[1]李娜;郭增丽;迟令懿;杨立卓;马志勇;付志婕-.甲醛对嗜酸性粒细胞EOL-1的急性损伤作用机制)[J].山东大学学报（医学版）,2022(11):54-62,101

Tiron,+DPI,+Trion

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