目的:神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)是一种由躯体感觉神经病变或疾病引起的慢性疼痛,金雀异黄素(genistein,Gen)可能是治疗NP的潜在药物.因此,本研究旨在探讨Gen对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠背根神经节神经元(dorsal root ganglion neuron,DRGn)炎性损伤的作用及其可能的分子机制.方法:取出生1 d的幼年大鼠进行DRGn的分离和培养.取对数生长期的DRGn,分为8组:对照组、LPS组、Tubastatin A盐酸盐(tubastatin A hydrochloride,TSA)+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组、Gen2+TSA+LPS组、Gen2+pcDNA-组蛋白脱乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组.LPS组给予1μg/mL LPS处理24 h;TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组给予5μmol/L TSA、5μmol/L Gen、10μmol/L Gen预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+TSA+LPS组给予10μmol/L Gen和5μmol/L TSA共同预处理0.5 h后加入1μg/mL LPS处理24 h;Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组、Gen2+pcDNA3.1+LPS组将100 nmol/L pcDNA-HDAC6、pcDNA3.1质粒分别转染至DRGn,转染24 h后,给予10μmol/L Gen预处理0.5 h,再加入1μg/mL LPS处理24 h.采用real-time RT-PCR检测DRGn中HDAC6 mRNA的表达水平,CCK-8法检测DRGn活力,流式细胞术检测DRGn凋亡情况,ELISA检测DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平;蛋白质印迹法检测DRGn中HDAC6、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、NF-κB p65的蛋白质表达水平.结果:与对照组相比,LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05).与LPS组相比,TSA+LPS组、Gen1+LPS组、Gen2+LPS组和Gen2+TSA+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著下调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著降低,DRGn活性显著升高且凋亡率显著降低,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05),且Gen2+TSA+LPS组上述变化最明显.与Gen2+LPS组相比,Gen2+pcDNA-HDAC6+LPS组大鼠DRGn中HDAC6 mRNA和蛋白质的表达水平,TLR4和MyD88蛋白质表达水平均显著上调,p-NF-κB p65/NF-κB p65比值显著增加,DRGn活性显著降低且凋亡率显著升高,DRGn培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05).结论:Gen可减轻LPS诱导的大鼠DRGn炎性损伤,其作用机制可能与下调HDAC6的表达,进一步抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活有关.

金雀异黄素;神经病理性疼痛;背根神经节神经元;组蛋白脱乙酰化酶6;脂多糖

周松林;黄俊卿;李科;都帅刚;杨彬;郭中华

河南省中医院疼痛科,郑州450002;河南省中医院骨病一科,郑州450002

中南大学学报（医学版）

[1]周松林;黄俊卿;李科;都帅刚;杨彬;郭中华-.金雀异黄素通过下调HDAC6减轻LPS诱导的大鼠背根神经节神经元炎性损伤)[J].中南大学学报（医学版）,2022(06):707-716

DRGn,Tubastatin,tubastatin,Gen1+LPS,Gen2+LPS,Gen2+TSA+LPS,Gen2+pcDNA,Gen2+pcDNA3,TSA+LPS,HDAC6+LPS

金雀异黄素,大鼠背根神经节,背根神经节神经元,炎性损伤,神经病理性疼痛,neuropathic,pain,NP,躯体感觉,感觉神经,神经病变,慢性疼痛,genistein,潜在药物,脂多糖,lipopolysaccharide,dorsal,root,ganglion,neuron,幼年大鼠,对数生长期,盐酸盐,hydrochloride,组蛋白,脱乙酰化,histone,deacetylase,nmol,质粒,转染,real,CCK,流式细胞术,养上,上清液,蛋白质印迹法,Toll,样受体,like,receptor,TLR4,髓样分化因子,myeloid,differentiation,MyD88,p65,蛋白质表达水平,凋亡率,可减轻

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