背景:在辅助生殖工作中,玻璃化二次冷冻可以有效提高胚胎利用率.课题组前期研究结果显示,不同发育时期的玻璃化二次冷冻显著影响胚胎发育,但其机制尚不明确.目的:探讨不同时期玻璃化二次冷冻影响胚胎发育潜力的可能机制.方法:收集ICR小鼠体内受精的2-细胞胚胎并进行体外培养,随机分为4组:对照组、8-细胞冷冻一次组(8C)、8-细胞冷冻一次解冻后于8-细胞期(8C-8C)或培养至囊胚期(8C-BL)再次冷冻.利用免疫荧光分析囊胚期H3K4me3、H3K9me2及H3K9AC的表达水平;实时荧光定量PCR分析多能性基因Cdx2、Oct4及Sox2的转录水平.结果 与结论:①免疫荧光结果显示,一次和二次冷冻均会导致囊胚期H3K9me2(P<0.01)及H3K9AC水平显著上升(P<0.0001);②一次冷冻不影响H3K4me3水平,但二次冷冻组H3K4me3水平显著下降,且在8C-BL组下降尤为严重(P<0.0001);③实时荧光定量PCR结果显示,一次冷冻及8-细胞期二次冷冻不会影响胚胎多能性基因Cdx2、Oct4和Sox2的表达水平,但8C-BL组胚胎多能性基因表达水平显著改变,Oct4的表达水平显著下降(P<0.01),而Cdx2(P<0.001)和Sox2(P<0.01)的表达水平显著上升;④结果表明,玻璃化二次冷冻对小鼠胚胎的表观遗传具有一定的负面影响,且囊胚期二次冷冻显著影响H3K4me3修饰及多能性相关基因表达水平.

早期胚胎;二次冷冻;小鼠;辅助生殖;组蛋白表观遗传;多能性基因

王建武;赵艳华;李竞宇;王加强

东北农业大学生命科学学院,黑龙江省哈尔滨市 150030;重庆市妇幼保健院人类胚胎工程重庆市重点实验室,重庆市 400013

中国组织工程研究

[1]王建武;赵艳华;李竞宇;王加强-.囊胚期玻璃化二次冷冻对小鼠胚胎组蛋白表观修饰及多能性基因表达的影响)[J].中国组织工程研究,2022(31):5047-5052

二次冷冻,H3K9AC,组蛋白表观遗传

囊胚,玻璃化,小鼠胚胎,多能性基因,辅助生殖,前期研究,不同发育时期,胚胎发育,发育潜力,可能机制,ICR,受精,体外培养,8C,解冻,BL,免疫荧光分析,H3K4me3,H3K9me2,Cdx2,Oct4,Sox2,转录水平,基因表达水平,相关基因表达,早期胚胎

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