[目的]探讨非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)衣壳蛋白E120R在病毒感染中的作用,确定与E120R蛋白互作的宿主蛋白.[方法]将ASFV分离株CADC_HN09株E120R基因合成并克隆于pGBKT7表达载体,获得pGBKT7-E120R诱饵质粒,同时构建E120R基因截短表达质粒pGBKT7-E120R-1(1-61位氨基酸)和pGBKT7-E120R-2(62-122位氨基酸).经毒性和自激活性检测后,通过酵母双杂交技术对骨髓巨噬细胞(BMDMs)cDNA均一化酵母文库进行初步筛选,以获得与ASFV E120R蛋白互作的蛋白.通过NCBI数据库进行序列比对并经免疫共沉淀试验验证,确定互作的宿主蛋白.筛选的宿主蛋白经webgenstal在线分析网站初步进行GO功能和KEGG通路富集分析,以确定所筛选的宿主蛋白参与的生物过程与信号通路.[结果]诱饵质粒pGBKT7-E120R-2无毒性和自激活性,可用于文库筛选.通过酵母双杂交系统从BMDMs cDNA均一化酵母文库中初步筛选到46个阳性克隆并进行回转验证,经NCBI数据库序列比对分析共获得29个宿主蛋白.免疫共沉淀试验结果显示,多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)和干扰素刺激基因15(ISG15)均与E120R蛋白存在互作.GO功能富集分析表明,所筛选的宿主蛋白可参与代谢过程、生物调节、应激反应等生物过程;KEGG通路富集分析表明,这些宿主蛋白可参与抗原呈递、铁死亡和坏死性凋亡等多条信号通路.[结论]ASFV E120R蛋白可与宿主免疫应答、细胞死亡等信号通路相关的多种宿主蛋白互作,为进一步研究ASFV E120R蛋白在病毒感染过程中的作用提供了重要理论依据.

非洲猪瘟病毒(ASFV);酵母双杂交;E120R蛋白;互作蛋白

崔帅;王洋;郭晓宇;陈世钰;蒋亚君;庞忠宝;黄建新;孟凡峰;姜一瞳;朱鸿飞;贾红

中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,北京100193;大理农林职业技术学院,大理671003;北京大风家禽育种有限公司,北京100193

中国畜牧兽医

[1]崔帅;王洋;郭晓宇;陈世钰;蒋亚君;庞忠宝;黄建新;孟凡峰;姜一瞳;朱鸿飞;贾红-.利用酵母双杂交技术筛选和鉴定非洲猪瘟病毒E120R蛋白的互作宿主蛋白)[J].中国畜牧兽医,2022(11):4139-4149

E120R,HN09,webgenstal,PCBP2

酵母双杂交技术,技术筛选,定非,非洲猪瘟病毒,宿主蛋白,African,swine,fever,virus,ASFV,衣壳蛋白,蛋白互作,分离株,CADC,基因合成,pGBKT7,表达载体,诱饵,质粒,截短表达,自激,活性检测,巨噬细胞,BMDMs,cDNA,均一化,母文,初步筛选,NCBI,序列比对,免疫共沉淀,在线分析,通路富集分析,白参,生物过程,无毒性,文库筛选,酵母双杂交系统,回转,比对分析,共获,多聚,胞嘧啶,结合蛋白,干扰素刺激基因,ISG15,功能富集分析,代谢过程,应激反应,抗原呈递,铁死亡,坏死性凋亡,多条,宿主免疫,免疫应答,细胞死亡,互作蛋白

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