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阳春砂龙脑基二磷酸合酶关键氨基酸位点筛选及突变体的构建
文献摘要：
目的 对阳春砂萜类合成关键酶龙脑基二磷酸合酶(bornyl diphosphate synthase,BPPS)催化生成龙脑基二磷酸(bornyl diphosphate,BPP)的关键氨基酸位点解析,为阳春砂BPPS的功能优化并且促进其在代谢工程中的应用奠定基础.方法 比较阳春砂、海南砂的BPPS (AvBPPS、A1BPPS)及已报道的其余3种植物的BPPS,发现AvBPPS催化产生BPP的比率较高.通过分子建模和底物对接、保守基序预测,以及与其他BPPS、单萜合酶序列多重比对的方法,筛选关键氨基酸位点,探索决定AvBPPS产生BPP及其较高比率BPP的关键活性位点,据此设计突变体,并用快速定点突变的方法获得突变体.结果 筛选出了20个可能影响AvBPPS催化的关键位点,并根据这些位点,设计了20个AvBPPS突变体及1个AlBPPS突变体,成功构建其中17个突变体,诱导表达获得了纯化蛋白.结论 综合使用多种分析方法,理性设计BPPS的突变位点,并获得了相应突变体及蛋白,为通过氨基酸定点突变探索BPPS的催化机制及功能优化提供了基础.
文献关键词：
阳春砂;海南砂;龙脑基二磷酸合酶;定点突变;蛋白表达
中图分类号：
作者姓名：
赵圆圆;孙叶雯;郑诗敏;李萌;马东明;杨锦芬
作者机构：
广州中医药大学中药学院(中药数理工程研究院)岭南中药资源教育部重点实验室,广东广州510006
文献出处：
引用格式：
[1]赵圆圆;孙叶雯;郑诗敏;李萌;马东明;杨锦芬-.阳春砂龙脑基二磷酸合酶关键氨基酸位点筛选及突变体的构建)[J].中草药,2022(02):529-537
A类：
龙脑基二磷酸合酶,bornyl,BPPS,海南砂,AvBPPS,A1BPPS,AlBPPS
B类：
阳春砂,关键氨基酸位点,突变体,萜类合成,合成关键酶,diphosphate,synthase,化生成,成龙,点解,功能优化,代谢工程,分子建模,底物,保守基序,单萜,选关,活性位点,定点突变,关键位点,诱导表达,理性设计,突变位点,催化机制
AB值：
0.176954
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