目的 探讨自噬在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中的作用及机制.方法 用LPS刺激A549细胞建立炎症反应模型,按浓度(0、1、5、10μg/mL)和时间(0、4、8、12、24 h)分组(各组n=3).用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞,分为对照组、LPS组、3-MA组、3-MA+LPS组(各组n=3);用自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,RAPA)处理细胞,分为对照组、LPS组、RAPA组、RAPA+LPS组(各组n=3).通过Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)过表达质粒和siRNA转染A549细胞,实验分为两部分,每部分各分4组(各组n=3):TLR4过表达对照组、TLR4过表达组、TLR4过表达对照+LPS组、TLR4过表达+LPS组;TLR4沉默对照组、TLR4沉默组、TLR4沉默对照+LPS组、TLR4沉默+LPS组.采用CCK-8法检测细胞存活率,免疫印迹法检测炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)、TLR4蛋白表达水平.结果 1μg/mL浓度的LPS刺激12 h后,炎症指标(NLRP3、Caspase-1、ASC)、自噬指标(LC3B、Beclin-1、P62)和TLR4蛋白表达均明显升高并达峰值(P<0.05).与LPS组比较,3-MA+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高,TLR4蛋白表达上调;RAPA+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低,TLR4蛋白表达下调(P<0.05).TLR4过表达+LPS组较TLR4过表达对照+LPS组自噬相关蛋白表达降低,炎症相关蛋白表达升高;TLR4沉默+LPS组较TLR4沉默对照+LPS组自噬相关蛋白表达升高,炎症相关蛋白表达降低(P<0.05).结论 在LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应中,自噬流对A549细胞具有一定保护作用;TLR4介导自噬流对LPS诱导的人肺泡上皮A549细胞炎症反应进行负向调控.

自噬;炎症反应;脂多糖;人肺泡上皮A549细胞

时佳;陶慧娴;郭艳;邹芸苏;王木子;卢志涛;丁溢芳;许卫东;周晓光

南京医科大学附属儿童医院新生儿医疗中心,江苏南京 210008;张家港市第一人民医院新生儿科,江苏张家港 215600

中国当代儿科杂志

[1]时佳;陶慧娴;郭艳;邹芸苏;王木子;卢志涛;丁溢芳;许卫东;周晓光-.自噬在脂多糖诱导的A549细胞炎症反应中的作用及机制研究)[J].中国当代儿科杂志,2022(10):1161-1170

MA+LPS,RAPA+LPS

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