目的 观察LncRNA MRAK052509对矽尘诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT过程中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA等关键因子表达的影响,为明确矽肺发病分子机制和纤维化的干预提供基础.方法 建立NR8383巨噬细胞/RLE-6TN肺泡Ⅱ型上皮细胞共培养体系;将NR8383巨噬细胞种入Transwell小室的上室,下室种入RLE-6TN细胞;细胞分为四组,分别是空白对照组、矽尘组、无义序列对照组(sh-NC组)、LncRNA MRAK052509敲减组(sh-MRAK052509组);空白对照组及矽尘组下室种入RLE-6TN细胞,sh-NC组和sh-MRAK052509组下室分别种入稳定转染shRNA-NC和shRNA-LncRNA MRAK052509的RLE-6TN细胞;培养24h后,除空白对照组外,其余各组向Transwell上室加入40 μg/cm2 Si02粉尘,对照组加入等量的Ham'S F12K培养液;培育24h后,观察下室细胞形态学变化;采用qPCR法/Western blot法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA的mRNA/蛋白相对表达量.结果 形态学观察显示,空白对照组的RLE-6TN细胞呈多边形或圆形鹅卵石状.经矽尘处理后,细胞间接触减少,呈长梭型、纺锤型等成纤维细胞样形态.敲减LncRNA MRAK052509后,细胞形态同空白对照组相似,呈上皮样特征.qPCR显示转染sh-LncRNAMRAK052509可有效敲减RLE-6TN细胞中的lncRNA MRAK052509.qPCR和WB结果显示,各组细胞中E-cadherin、N-cadherin、α-SMA基因(F=9.950,P=0.004;F=11.638,P=0.003;F =4.497,P=0.040)及蛋白(F=122.004,P＜0.001;F =24.248,P=0.001;F =22.433,P＜0.001)的表达水平均有所改变.与空白对照组相比,矽尘组E-cadherin mRNA和蛋白表达水平较空白对照组降低,sh-MRAK052509组E-cadherin mRNA和蛋白水平较sh-NC组升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);矽尘组细胞的N-cadherin、α-SMAmRNA及蛋白表达水平升高,转染sh-LncRNA MRAK052509后,sh-MRAK052509组N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达水平较sh-NC组明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).秩相关结果显示,E-cadherin和α-SMA mRNA及蛋白表达水平呈强负相关(r=-0.759,P=0.004;r=-0.780,P=0.003).结论 敲低LncRNA MRAK052509可促进E-cadherin表达,抑制N-cadherin、α-SMA mRNA和蛋白表达,对矽尘诱导的RLE-6TN细胞EMT过程有一定干预作用.

长链非编码RNA;上皮-间质转化;E-钙黏蛋白;N-钙黏附蛋白;α-平滑肌肌动蛋白

刘煊;高芳瑜;田雪艳;焦子铭;王发选

宁夏医科大学公共卫生与管理学院宁夏环境因素与慢性病控制重点实验室,宁夏银川750004

现代预防医学

[1]刘煊;高芳瑜;田雪艳;焦子铭;王发选-.LncRNA MRAK052509对矽肺上皮-间质转化过程中关键因子E-cadherin、N-cadherin、 α-SMA的影响研究)[J].现代预防医学,2022(03):492-496,526

MRAK052509,RLE,6TN,F12K,LncRNAMRAK052509

矽肺,间质转化,转化过程,关键因子,cadherin,矽尘,肺泡,上皮细胞,EMT,预提,NR8383,巨噬细胞,细胞共培养,共培养体系,Transwell,小室,四组,空白对照,无义,NC,敲减,室分,别种,稳定转染,shRNA,24h,Si02,粉尘,等量,Ham,培养液,细胞形态学,qPCR,blot,白相,相对表达量,形态学观察,多边形,鹅卵石,石状,纺锤,成纤维细胞,上皮样,lncRNA,WB,蛋白表达水平,SMAmRNA,秩相关,敲低,定干,干预作用,长链非编码,钙黏蛋白,黏附蛋白,平滑肌肌动蛋白

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