目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBx）是否通过调控活性氧（reactive oxygen species，ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）信号通路引起足细胞焦亡。方法:采用小鼠肾足细胞过表达 HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组：空白对照组（不予特殊处理）、阴性对照组（转染对照慢病毒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+ROS抑制剂组（转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂）。电镜下观察足细胞的形态学改变；二氯二氢荧光素二乙酸酯（dichlorodihydrofluorescein diacetate assay，DCFH-DA）法检测ROS的生成；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定试验分别检测胱天蛋白酶1（Caspase-1）酶活性、乳酸脱氢酶、白细胞介素（IL）-1β和IL-18水平；实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测细胞焦亡相关蛋白如NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白水平的表达；TUNEL染色和流式细胞术检测焦亡细胞数量；免疫荧光染色检测Desmin和Nephrin的表达。 结果:HBx过表达慢病毒成功感染足细胞后，电镜下观察到细胞发生焦亡相关形态学改变；与阴性对照组相比，HBx过表达组ROS水平显著升高（ P<0.05）；Hoechst 33342染色发现HBx过表达后细胞核浓缩；TUNEL染色和流式细胞术证明HBx过表达后足细胞发生了焦亡；焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达显著上调（均 P<0.05）；Caspase-1酶活性、乳酸脱氢酶和Desmin表达水平升高（均 P<0.05）。而 NLRP3敲低或ROS抑制减弱了HBx过表达引起的足细胞焦亡以及相关蛋白表达增加（均 P<0.05）。 结论:ROS/NLRP3通路在HBx过表达引起的足细胞焦亡中起着重要作用。

乙型肝炎病毒;活性氧;NLR家族，热蛋白结构域包含蛋白3;细胞焦亡;肾小球肾炎;乙型肝炎病毒X蛋白

余亚妮;李保爽;陈月琪;孙静宜;杨小倩;冯墨宣;蒋伟

青岛大学附属医院肾内科，青岛　266003

中华肾脏病杂志

[1]余亚妮;李保爽;陈月琪;孙静宜;杨小倩;冯墨宣;蒋伟-.乙型肝炎病毒X蛋白通过调控活性氧/NLRP3信号通路介导乙肝相关性肾小球肾炎足细胞焦亡)[J].中华肾脏病杂志,2022(10):905-915

+NLRP3,+ROS

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