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呼吸道合胞病毒滴度间接免疫荧光检测方法的建立及验证
文献摘要：
目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度的间接免疫荧光检测方法,并进行验证.方法 以Synagis(Palivizumab)为一抗,荧光标记羊抗人IgG为二抗,建立用于RSV滴度检测的间接免疫荧光法,并对HEp-2细胞接种密度(3×104、4×104、5×104、6×104、7×104、8×104个/孔)、细胞培养液中胎牛血清浓度(2.5％、5％、10％、20％)、病毒培养时间(20、24、26、30、38、48h)、抗体稀释度[一抗:1∶(1 000/3)、1 ∶1 000、1 ∶3 000、1 ∶9 000,二抗:1 ∶(400/3)、1 ∶400、1 ∶1 200]进行优化.验证方法的特异性、线性范围、准确性、重复性.结果 建立的方法最佳工作条件:HEp-2细胞接种密度为6×104个/孔,胎牛血清浓度为2.5％,病毒培养时间为24～26 h,一抗稀释度为1∶1 000,二抗稀释度为1:400.RSV可见特异性荧光,狂犬病病毒、流感病毒、风疹病毒均未见荧光;RSV滴度理论值在1.70×107～5.43×103 FFU/mL范围内,与检测值呈良好的线性关系,回归方程为y=1.031 3 x-0.250 8,R2=0.989 7;准确性验证回收率在70％～130％范围内;重复性验证RSD均≤15％.结论 建立的RSV滴度间接免疫荧光检测方法具有良好的特异性、准确性、重复性,目检测周期短,可用干RSV滴度快速检测.
文献关键词：
呼吸道合胞病毒;间接免疫荧光法;病毒滴度
中图分类号：
作者姓名：
宋月爽;陈晓旭;潘东;卢井才;张立娜;刘禹壮;原秀娟;段盛博;袁若森;赵慧
作者机构：
长春百克生物科技股份公司,吉林长春130012;吉林大学生命科学院,吉林长春130012;中国食品药品检定研究院呼吸道病毒疫苗室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京102629
文献出处：
引用格式：
[1]宋月爽;陈晓旭;潘东;卢井才;张立娜;刘禹壮;原秀娟;段盛博;袁若森;赵慧-.呼吸道合胞病毒滴度间接免疫荧光检测方法的建立及验证)[J].中国生物制品学杂志,2022(08):1002-1005,1012
A类：
Synagis,Palivizumab,胎牛血清浓度
B类：
呼吸道合胞病毒,病毒滴度,免疫荧光检测,respiratory,syncytial,virus,RSV,荧光标记,IgG,间接免疫荧光法,HEp,接种密度,细胞培养,培养液,培养时间,48h,验证方法,线性范围,工作条件,抗稀释,狂犬病病毒,流感病毒,风疹病毒,理论值,FFU,检测值,RSD,周期短,快速检测
AB值：
0.246146
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