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磁珠法结合实时定量PCR检测新型冠状病毒灭活疫苗中宿主细胞残留DNA的验证及应用
文献摘要：
目的 对磁珠法结合实时定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测新型冠状病毒(简称新冠)灭活疫苗(Vero细胞)中宿主细胞残留DNA(residual cell DNA,rcDNA)进行验证及应用.方法 利用磁珠与溶液中DNA的特异性结合来提取样品中rcDNA.将已知浓度的细胞DNA标准品系列稀释后,根据DNA标准品的循环阈值与浓度之间的线性关系,对未知样品中的rcDNA进行定量分析.对方法进行线性和范围、专属性、准确度、精密度验证,并使用该方法对新冠灭活疫苗(Vero细胞)生产过程样品进行rcDNA及其片段大小检测.结果 标准品检测范围为0.000 3～30 pg/μL,该方法的标准曲线决定系数(R2)＞0.99,扩增效率为90％～110％.质控样品回收率为50％～150％,相对标准偏差(RSD)均小于30％.试验结果的各项参数均符合标准.结论 磁珠法可解决rcDNA检测中样品前处理提取DNA的技术难点,qPCR能够简便、快速、准确地对新冠疫苗生产过程中的rcDNA进行定量测定.该方法适用于新冠疫苗中rcDNA的检测及疫苗生产过程和成品的质量控制,对其他采用同样细胞基质的病毒性疫苗质量控制也具有借鉴意义.
文献关键词：
新型冠状病毒灭活疫苗;Vero细胞;宿主细胞残留DNA;实时定量聚合酶链反应;磁珠法
中图分类号：
作者姓名：
周艳萍;卢佳;李茜;林凤杰;杨安纳;孟胜利;王泽鋆;申硕
作者机构：
武汉生物制品研究所有限责任公司,湖北武汉430207;国家联合疫苗工程技术研究中心,湖北武汉430207
文献出处：
引用格式：
[1]周艳萍;卢佳;李茜;林凤杰;杨安纳;孟胜利;王泽鋆;申硕-.磁珠法结合实时定量PCR检测新型冠状病毒灭活疫苗中宿主细胞残留DNA的验证及应用)[J].中国生物制品学杂志,2022(06):711-717
A类：
rcDNA
B类：
磁珠法,新型冠状病毒灭活疫苗,宿主,主细胞,real,quantitative,qPCR,Vero,residual,cell,特异性结合,标准品,品系,循环阈值,专属性,精密度,密度验证,新冠灭活疫苗,品检,检测范围,pg,标准曲线,决定系数,质控样品,样品回收,相对标准偏差,RSD,参数均,符合标准,样品前处理,技术难点,新冠疫苗,疫苗生产,定量测定,病毒性,苗质,实时定量聚合酶链反应
AB值：
0.25384
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