目的:探讨尼克酰胺(NIC)在人胚胎干细胞(hESCs)诱导分化为神经嵴细胞过程中的作用，为hESCs进一步分化为角膜内皮细胞提供实验基础。方法:取培养5~7 d的hESCs细胞系H1进行诱导，根据诱导培养基中干预组分的不同分为未添加NIC组(仅使用诱导培养基)、NIC添加组(含10 mmol/L NIC的诱导培养基)、NIC+白藜芦醇(Res)组(含10 mmol/L NIC、10 μmol/L Res的诱导培养基)和Sirtinol组(含10 μmol/L Sirtinol的诱导培养基)，其中Res和Sirtinol分别为SIRT1活性激动剂和抑制剂，各组连续诱导7 d。采用实时荧光定量PCR法检测诱导1、3、5、7 d hESCs及神经嵴细胞标志物mRNA相对表达量；诱导后7 d，采用免疫荧光染色法测定hESCs来源神经嵴细胞相关标志蛋白的表达，采用流式细胞术分析hESCs来源神经嵴细胞表面标志物神经生长因子受体(P75)和人自然杀伤因子1(HNK-1)阳性细胞比率，以评价NIC诱导效率及调控SIRT1对HNK-1表达的影响。结果:与未添加NIC组相比，NIC添加组处理5 d后全能性基因八聚体结合转录因子4(OCT4)和同源域蛋白(NANOG) mRNA相对表达量显著降低，神经嵴细胞标志物P75、HNK-1、SRY相关HMG盒9(SOX9)和SOX10 mRNA相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，未添加NIC组神经嵴细胞标志物P75表达较弱，HNK-1仅有零星表达，转录因子激活蛋白2β(AP-2β)及成对样同源域转录因子2(PITX2)均未见阳性着色；NIC添加组细胞中P75、HNK-1、AP-2β及PITX2均呈广泛的强阳性表达。NIC添加组P75 +HNK-1 +和P75 +细胞比率明显高于未添加NIC组，差异均有统计学意义( t＝8.481， P＝0.001； t＝2.987， P＝0.041)。未添加NIC组、NIC添加组、NIC+Res组和Sirtinol组HNK-1 +细胞比率分别为(34.267±12.522)%、(89.633±1.358)%、(64.667±6.429)%和(86.300±3.460)%，总体比较差异有统计学意义( F＝36.799， P<0.001)，其中，NIC+Res组HNK-1 +细胞比率均明显低于NIC添加组和Sirtinol组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:NIC可通过抑制SIRT1的活性促进HNK-1表达，提高hESCs来源神经嵴细胞的分化效率，为神经嵴细胞相关疾病的治疗，如角膜内皮移植提供新的种子细胞来源。

神经嵴;尼克酰胺;诱导分化;人胚胎干细胞

段豪云;李文静;贾艳妮;赵灿;周庆军;李宗义

山东第一医科大学附属眼科研究所　山东省眼科学重点实验室－省部共建国家重点实验室培育基地，青岛　266071;山东第一医科大学附属眼科研究所　山东第一医科大学附属眼科医院（山东省眼科医院），济南　250000

中华实验眼科杂志

[1]段豪云;李文静;贾艳妮;赵灿;周庆军;李宗义-.尼克酰胺对人胚胎干细胞向神经嵴细胞分化的诱导作用)[J].中华实验眼科杂志,2022(12):1141-1148

NIC+,Sirtinol,P75 ,+HNK,NIC+Res

尼克酰胺,人胚胎干细胞,神经嵴细胞,细胞分化,诱导作用,hESCs,诱导分化,角膜内皮细胞,细胞系,H1,诱导培养基,加组,白藜芦醇,SIRT1,激动剂,相对表达量,免疫荧光染色法,流式细胞术,细胞表面,表面标志物,物神,神经生长因子受体,杀伤,阳性细胞,全能性,OCT4,源域,NANOG,SRY,HMG,SOX9,SOX10,染色结果,零星,星表,转录因子激活蛋白,AP,PITX2,着色,阳性表达,1 ,细胞的分化,相关疾病,角膜内皮移植,种子细胞

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