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干扰SKP1基因对帕金森病细胞模型凋亡及泛素蛋白酶体系统的调控机制
文献摘要：
目的:探讨干扰S期激酶相关蛋白1(S-phase kinase associated protein 1，SKP1)基因对1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)诱导致帕金森病(Parkinson's disease，PD)细胞模型凋亡及泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system，UPS)降解α-突触核蛋白(α-synuclein，α-syn)机制的影响。方法:将SH-SY5Y细胞分为对照组、MPP+组、SKP1干扰组、SKP1干扰+ MG132(UPS抑制剂)组，对照组细胞正常培养，后三组细胞先用MPP+(0.5 mmol/L)孵育24 h作为PD模型细胞，SKP1干扰组转染慢病毒SKP1-siRNA，SKP1干扰+MG132组转染慢病毒SKP1- siRNA后加入MG132(0.5 μmol/L)干预24 h。采用RT-PCR和Western blot检测细胞中SKP1、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein l light chain 3，LC3)、溶酶体相关膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein，LAMP2)、α-syn、泛素激活酶E1(ubiquitin activating enzyme E1，UBE1)、parkin、p27的基因和蛋白表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期水平，CCK-8法检测细胞增殖水平；采用免疫共沉淀法探究SKP1与p27的相互作用。使用SPSS 23.0软件进行统计学分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:RT-PCR和Western blot结果显示，四组细胞的自噬相关蛋白及泛素相关蛋白LC3、LAMP2、α-syn、UBE1、parkin、p27的mRNA(
F＝99.155，43.028，138.464，28.200，22.009，28.147，均
P<0.05)和蛋白(
F＝245.517，157.634，315.920，2 336.472，477.429，2 350.201，均
P<0.05)表达水平均差异有统计学意义。SKP1干扰组LC3、LAMP2、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均低于MPP+组(均
P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均高于MPP+组(均
P<0.05)；SKP1干扰+ MG132组LC3、α-syn、p27的mRNA和蛋白表达水平均高于SKP1干扰组(均
P<0.05)，UBE1、parkin的mRNA和蛋白表达水平均低于SKP1干扰组(均
P<0.05)。流式细胞术和CCK-8法检测结果显示，四组间细胞凋亡率和细胞抑制率均差异具有统计学意义(
F＝2 749.420，171.508，均
P<0.05)。SKP1干扰组细胞凋亡率低于MPP+组[(8.22±0.25)%，(15.30±0.21)%，
P<0.05]，而细胞抑制率低于MPP+组[(26.31±3.73)%，(55.05±3.84)%，
P<0.05]。SKP1干扰+ MG132组细胞凋亡率[(9.49±0.07)%]高于SKP1干扰组，细胞抑制率[(36.06±2.85)%]高于SKP1干扰组(均
P<0.05)。免疫共沉淀法结果显示，SKP1免疫沉淀后，p27随之减少。
结论:干扰SKP1基因后，PD细胞自噬功能降低，可能与parkin促使α-syn发生泛素化，激活UBE1/parkin介导UPS通路降解α-syn，并介导P27抑制细胞凋亡有关。
文献关键词：
帕金森病;泛素-蛋白酶体系统;S期激酶相关蛋白1;α-突触核蛋白;细胞凋亡
中图分类号：
作者姓名：
孙振杰;佟强;高琪;卢婷;陈泉;田向阳;孙波
作者机构：
南京医科大学附属淮安市第一人民医院神经内科，淮安 223000
文献出处：
引用格式：
[1]孙振杰;佟强;高琪;卢婷;陈泉;田向阳;孙波-.干扰SKP1基因对帕金森病细胞模型凋亡及泛素蛋白酶体系统的调控机制)[J].中华行为医学与脑科学杂志,2022(11):976-983
A类：
+MG132,UBE1
B类：
SKP1,帕金森病细胞模型,泛素蛋白酶体系统,调控机制,phase,kinase,associated,protein,苯基,吡啶,MPP+,Parkinson,disease,ubiquitin,proteasome,system,UPS,突触核蛋白,synuclein,SH,SY5Y,先用,孵育,转染,慢病毒,siRNA,blot,微管,轻链,microtubule,light,chain,LC3,溶酶体,膜蛋白,lysosome,membrane,LAMP2,activating,enzyme,parkin,p27,蛋白表达水平,流式细胞仪,细胞周期,CCK,免疫共沉淀,共沉淀法,统计学分析,单因素方差分析,LSD,四组,自噬相关蛋白,白及,平均差,流式细胞术,细胞凋亡率,细胞抑制率,免疫沉淀,细胞自噬,泛素化,P27
AB值：
0.225111
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