目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病(DN)足细胞损伤及凋亡的影响.方法 体外实验:通过RT-PCR法检测高糖(30 mmol/L)环境下足细胞中miR-34a表达水平,构建miR-34a过表达足细胞系(miR-34a组)及其阴性对照(miR-NC组),使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系,构建Notch 1过表达足细胞系(Notch 1组)和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系(miR-34+Notch 1组);采用CCK-8法检测足细胞存活情况,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平.体内实验:通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组(n=15/组),另选15只不做干预小鼠为对照组,miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)],连续注射3 d,4周后,HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况,Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白表达水平.结果 高糖环境下足细胞中miR-34a表达水平低于正常糖诱导下足细胞和高渗透压下作用下的足细胞(P<0.05),miR-34a组足细胞中Notch 1表达水平低于miR-NC组(P<0.05);Notch 1 wt/miR-34a组荧光素酶活力值低于Notch 1 wt组(P<0.05),而Notch 1 mut/miR-34a组和Notch 1 mut/miR-NC组荧光素酶活力值差异无统计学意义(P>0.05);miR-34a组足细胞的A值高于miR-NC组(P<0.05),而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均低于miR-NC组(P<0.05);Notch 1组足细胞的A值低于miR-NC组(P<0.05),而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-NC组(P<0.05);miR-34a+Notch 1组足细胞的A值低于miR-34a组(P<0.05),而细胞凋亡率和caspase-3、caspase-9、Bax/Bcl-2蛋白水平均高于miR-34a组(P<0.05).对照组小鼠肾组织结构清晰完整,模型组小鼠肾小球肿胀、体积增大,miR-34a组小鼠肾组织病变程度得到改善;模型组小鼠肾组织miR-34a表达水平低于对照组(P<0.05),miR-34a组小鼠的肾组织miR-34a表达水平高于对照组(P<0.05);模型组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平高于对照组(P<0.05),miR-34a组小鼠肾组织凋亡指数和caspase-3、caspase-9、Notch 1蛋白水平低于模型组(P<0.05).结论 miR-34a可通过靶向作用Notch 1改善DN足细胞损伤和凋亡.

糖尿病肾病;miR-34a;Notch信号通路;足细胞;凋亡

王欢岚;刘红;张燕敏;陈伟栋

武汉市第一医院(武汉市中西医结合医院)肾内科,湖北 武汉 430022

南方医科大学学报

[1]王欢岚;刘红;张燕敏;陈伟栋-.miR-34a通过靶向抑制Notch信号通路减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤)[J].南方医科大学学报,2022(12):1839-1845

34+Notch,34a+Notch

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