目的:探讨微小RNA-29c(microRNA-29c,miR-29c)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导小鼠海马神经元HT22细胞损伤效应的影响及机制.方法:构建慢病毒(lentivirus,LV)介导的过表达/低表达miR-29c的小鼠海马神经元HT22,分为空载体细胞株(LV-vector)组、LV-vector+TNF-α组、miR-29c过表达细胞株(LV-miR-29c)+TNF-α组和miR-29c低表达细胞株(LV-miR-29c sponge)+TNF-α组.采用CCK-8法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验评价TNF-α对HT22细胞的毒性作用;免疫荧光染色观察肿瘤坏死因子受体1(tumor necrosis factor receptor 1,TNFR1)的表达;RT-qPCR检测miR-29c和TNFR1 mRNA的表达;Western blot检测TNFR1、TNFR相关死亡域蛋白(TNFR-associated death domain protein,TRADD)、Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)、pro-caspase-8、cleaved caspase-8、pro-caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平;Hoechst和TUNEL染色检测细胞凋亡率.结果:(1)CCK-8和LDH释放实验结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组细胞活力显著上升(P<0.05),且LDH释放显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组细胞活力显著下降(P<0.05),且LDH释放显著增多(P<0.05).(2)RT-qPCR和免疫荧光结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1表达显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1表达显著增多(P<0.05).(3)Western blot结果显示,与LV-vector组相比,LV-vector+TNF-α组细胞中TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平表达显著下调(P<0.05),而LV-miR-29c sponge+TNF-α组TNFR1、TRADD、FADD、cleaved caspase-8和cleaved caspase-3蛋白水平显著上调(P<0.05).(4)Hoechst和TUNEL染色结果显示,与LV-vec-tor组相比,LV-vector+TNF-α组凋亡细胞数目显著增加(P<0.05);与LV-vector+TNF-α组相比,LV-miR-29c+TNF-α组凋亡细胞数目显著减少(P<0.05),而LV-miR-29c+sponge+TNF-α组凋亡细胞数显著增加(P<0.05).结论:miR-29c减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤,其机制可能与抑制TNFR1信号通路激活导致的细胞凋亡有关.

微小RNA-29c;肿瘤坏死因子α;TNFR1信号通路;细胞凋亡;海马神经元

遵义医科大学生理学教研室,贵州遵义563000

[1]李勃;鲁莹;万琪;梁璇;杨沂文;韩勇;曾俊伟-.miR-29c通过下调TNFR1信号通路减轻TNF-α诱导的小鼠海马神经元HT22细胞损伤)[J].中国病理生理杂志,2022(09):1537-1546

vector+TNF,29c+TNF,sponge+TNF,29c+sponge+TNF

miR,TNFR1,小鼠海马神经元,HT22,细胞损伤,microRNA,tumor,necrosis,损伤效应,慢病毒,lentivirus,LV,过表达,低表达,空载,体细胞,细胞株,CCK,乳酸脱氢酶,lactate,dehydrogenase,LDH,实验评价,毒性作用,免疫荧光染色,receptor,qPCR,blot,关死,associated,death,domain,protein,TRADD,Fas,结构域,FADD,caspase,cleaved,Hoechst,TUNEL,细胞凋亡率,细胞活力,蛋白水平表达,染色结果

0.136169