[背景]糖尿病是全球重要的公共卫生问题.研究表明二氯二苯基二氯乙烷(p,p'-DDE)与2型糖尿病的发病密切相关,然而相关分子机制尚不清楚.[目的]探讨p,p'-DDE对大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)H19差异甲基化区(DMR)甲基化及胰岛素分泌的影响.[方法]用不同浓度的p,p'-DDE(0、3.125、6.25、12.5、25、50、75μmol·L?1)染毒INS-1细胞24 h,采用CCK-8法检测INS-1细胞活力;以0、12.5、25、50μmol·L?1 p,p'-DDE作为后续实验浓度,染毒24 h.采用亚硫酸氢盐修饰测序法检测H19 DMR 24个CpG位点甲基化水平;采用实时荧光定量PCR检测胰岛素样生长因子2(IGF2)基因转录水平;采用Western blotting检测IGF2和1型胰岛素样生长因子受体(IGF1R)蛋白水平;采用葡萄糖刺激胰岛素分泌实验测定INS-1细胞胰岛素分泌功能(高糖和低糖浓度分别为5、25 mmol·L?1).[结果]与对照组相比,12.5μmol·L?1 p,p'-DDE增加INS-1细胞活力,然而,50、75μmol·L?1 p,p'-DDE抑制细胞活力(P<0.01),故本研究选择50μmol·L?1为最高染毒浓度.25μmol·L?1 p,p'-DDE暴露导致H19 DMR CpG18、CpG22～CpG24位点甲基化水平下调,50μmol·L?1 p,p'-DDE暴露导致H19 DMR CpG10～CpG24位点甲基化水平下调(P<0.05或P<0.01).不同浓度(12.5、25、50μmol·L?1)p,p'-DDE均可下调胰岛细胞IGF2 mRNA、蛋白表达和IGF1R蛋白表达,IGF2转录水平分别降低为对照组的67.8％、68.6％、62.5％,蛋白水平分别降低为对照组的73.3％、79.5％、80.9％,IGF1R蛋白水平分别降低为对照组的54.8％、25.6％、12.9％(P<0.01).在高糖环境(25 mmol·L?1葡萄糖)下,不同浓度p,p'-DDE均抑制胰岛素分泌水平,分别降低为对照组的85.0％、58.6％、49.5％(P<0.01).[结论]p,p'-DDE下调胰岛细胞H19 DMR甲基化水平,干扰IGF2/IGF1R信号通路,导致胰岛素分泌功能障碍.

二氯二苯基二氯乙烷;糖尿病;胰岛功能;H19;DNA甲基化;胰岛素样生长因子2;1型胰岛素样生长因子受体

宗艳秋;谢华森;李晓青;王莉君;杨磊;宋杨

杭州师范大学,浙江 杭州 310016

环境与职业医学

[1]宗艳秋;谢华森;李晓青;王莉君;杨磊;宋杨-.p,p'-DDE对胰岛素瘤细胞H19差异甲基化区甲基化及胰岛素分泌的影响)[J].环境与职业医学,2022(05):539-544

二氯二苯基二氯乙烷,CpG18,CpG22,CpG24,CpG10

DDE,胰岛素瘤,H19,INS,DMR,染毒,CCK,细胞活力,亚硫酸氢盐,甲基化水平,胰岛素样生长因子,IGF2,基因转录水平,blotting,IGF1R,实验测定,胰岛素分泌功能,低糖,糖浓度,可下,胰岛细胞,高糖环境,泌水,胰岛功能

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