[背景]砷染毒可损害滋养层细胞进而诱导流产,但其机制尚不清楚.[目的]探讨miR-145和PTEN/AKT/mTOR通路在砷致孕鼠流产及滋养层细胞损害中的作用.[方法]动物实验:SD孕鼠20只,随机分为正常对照组(生理盐水灌胃)、砷染毒流产组(10.65 mg·kg-1亚砷酸钠溶液灌胃,灌胃体积10 mL·kg-1),每组10只;砷染毒流产组出现流产后(染毒5～6 d),收集两组胎盘组织,实时定量PCR(RT-PCR)检测微小RNA-145(miR-145)、磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA的表达水平,蛋白印迹法检测PTEN、AKT、mTOR、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平.细胞实验:将永生化人滋养层细胞系(HTR-8/SVNEO细胞)分为对照组、砷染毒组、miR-145过表达组、砷染毒+miR-145过表达组,各组细胞密度为5×105个·孔-1,砷染毒剂量为20μmol·L-1,培养环境为37°C、5％CO2,处理72 h,MTT法检测细胞存活率,结晶紫染色法检测单克隆形成数目,流式细胞法检测凋亡水平,Image J Angiogenesis Analyzer 1.8.0插件测定细胞总血管长度和总血管数目;基因和蛋白的检测指标和方法同"动物实验".[结果](1)动物实验:与正常对照组比较,砷染毒流产组胎盘组织miR-145表达水平升高(P<0.05),PTEN、AKT、mTOR mRNA及其蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05).(2)细胞实验:与对照组比较,砷染毒组、miR-145过表达组、砷染毒+miR-145过表达组存活率、单克隆形成数目、总血管长度、总血管数目降低,凋亡率升高(P<0.05);与砷染毒组、miR-145过表达组比较,砷染毒+miR-145过表达组存活率、单克隆形成数目、总血管长度、总血管数目降低,凋亡率水平升高(P<0.05).与对照组比较,砷染毒组、miR-145过表达组、砷染毒+miR-145过表达组miR-145 mRNA表达水平升高(P<0.05),PTEN、AKT、mTOR mRNA及其蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05);与砷染毒组、miR-145过表达组比较,砷染毒+miR-145过表达组miR-145 mRNA表达水平升高(P<0.05),PTEN、AKT、mTOR mRNA及其蛋白和p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05).[结论]miR-145可能与砷染毒所致流产有关,miR-145可抑制滋养层细胞HTR-8/SVNEO增殖、血管形成,促进其凋亡,其机制可能与PTEN/AKT/mTOR通路的抑制有关.

微小RNA-145;磷酸酶和张力蛋白同源物;蛋白激酶B;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白;砷;流产;滋养层细胞

彭涛;梅雪峰;李翔

重庆市巴南区人民医院妇产科,重庆 401320

环境与职业医学

[1]彭涛;梅雪峰;李翔-.miR-145和PTEN/AKT/mTOR通路在砷致大鼠流产及滋养层细胞损害中的作用)[J].环境与职业医学,2022(03):331-336,347

SVNEO

PTEN,AKT,mTOR,滋养层细胞,染毒,导流,孕鼠,动物实验,正常对照,生理盐水,水灌,灌胃,亚砷酸钠,钠溶液,胃体,流产后,胎盘组织,实时定量,磷酸酶和张力蛋白同源物,蛋白激酶,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,蛋白印迹法,蛋白表达水平,细胞实验,永生化,细胞系,HTR,过表达,+miR,细胞密度,毒剂,培养环境,MTT,细胞存活率,结晶紫,染色法,单克隆,克隆形成,流式细胞法,Image,Angiogenesis,Analyzer,插件,管长,检测指标,平降,凋亡率,可抑制,血管形成

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