目的 探索长链非编码RNA NEAT1(lncRNA NEAT1)在调控宿主细胞抗隐孢子虫免疫反应的作用及其初步机制.方法 采用微小隐孢子虫感染人结直肠癌细胞系HCT-8细胞(卵囊∶细胞比例为2∶1),构建微小隐孢子虫感染肠上皮细胞模型.分别于感染后4 h和36 h观察感染组及未感染对照组的HCT-8细胞生长情况;提取各组细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测炎性细胞因子白细胞介素-8(IL-8)的基因表达水平,并动态检测lncRNA NEAT1及其长转录本lncRNA NEAT1_2的表达.同时利用lncRNA NEAT1抑制剂Smart Silencer体系建立lncRNA NEAT1敲减的细胞模型(lncRNA NEAT1KD),比较其与未敲减对照组细胞IL-8 mRNA的表达水平.结果 微小隐孢子虫卵囊与HCT-8细胞共孵育4h后,子孢子贴附并入侵细胞,感染组 lncRNA NEAT1 和 lncRNA NEAT1_2 的相对表达量分别为 0.467±0.364 和 0.282±0.230,较对照组(0.960±0.152 和 0.865±0.219)降低(t=2.780、3.672,P＜0.05);IL-8 相对表达量为 1.273±0.647,与对照组(1.017±0.231)差异无统计学意义(t=0.828,P＞0.05);感染后36h,隐孢子虫成功侵入宿主细胞并繁殖,感染组细胞lncRNA NEAT1 及 lncRNA NEAT1_2 相对表达量分别为 2.728±0.897 和 3.303±2.643,较对照组(1.029±0.237和 1.000±0.449)均上调(t=4.854,P＜0.01;t=2.577,P＜0.05);IL-8 相对表达量为 6.835±2.065,较对照组(1.046±0.293)上调(t=5.652,P＜0.01).lncRNA NEAT1KD 组 lncRNA NEAT1 及 lncRNA NEAT1_2 的相对表达量分别为 0.382±0.126 和 0.312±0.068,较对照组(1.040±0.446 和 1.005±0.410)下调(t=4.481,P＜0.01;t=5.301,P＜0.01).LncRNA NEAT1KD 组 IL-8 mRNA 相对表达量为 0.525±0.230,低于对照组(0.959±0.229)(t=4.688,P＜0.01).结论 随着微小隐孢子虫感染进程,感染细胞lncRNA NEAT1的表达动态上调,并通过调控细胞因子IL-8的转录,参与宿主细胞抗微小隐孢子虫免疫应答.

微小隐孢子虫;长链非编码RNA;lncRNA NEAT1;IL-8;宿主免疫

李腾;沈玉娟;崔丽君;刘华;胡媛;姜岩岩;曹建平

中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所(国家热带病研究中心),国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室,世界卫生组织热带病合作中心,国家级热带病国际研究中心,上海200025

中国寄生虫学与寄生虫病杂志

[1]李腾;沈玉娟;崔丽君;刘华;胡媛;姜岩岩;曹建平-.长链非编码RNA NEAT1通过调控IL-8参与肠上皮细胞抗隐孢子虫反应)[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2022(04):487-492

Silencer,NEAT1KD

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