目的:评价抑制Ras相关的C3肉毒素底物1(ras-related C3 botulinum toxin substrate 1, Rac1）表达对高糖诱发神经元损伤的影响。方法:对数生长期PC12细胞接种于6孔板，采用随机数字表法将细胞分为4组（每组3孔）：正常浓度葡萄糖组（C组）、高浓度葡萄糖组（HG组）、高浓度葡萄糖+慢病毒抑制Rac1组（HG+shRac1组）、高浓度葡萄糖+慢病毒阴性对照组（HG+NC组）。C组以葡萄糖浓度为4.5 g/L的DMEM完全培养基培养PC12细胞24 h, HG组以葡萄糖浓度为45 g/L的DMEM完全培养基培养PC12细胞24 h, HG+shRac1组以葡萄糖浓度为45 g/L的DMEM完全培养基培养用Rac1 shRNA慢病毒载体转染的PC12细胞24 h，HG+NC组以葡萄糖浓度为45 g/L的DMEM完全培养基培养用阴性慢病毒载体转染的PC12细胞24 h。Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3, LC3）Ⅰ、LC3Ⅱ、Bcl-2/腺病毒E1B相互作用蛋白3 （Bcl-2/adenovirus E1B protein-interacting protein 3, BNIP3）和p62蛋白水平，并计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ；CCK-8法检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡率；二氢溴化乙啶法检测细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平；荧光定量PCR法检测自噬相关基因7 (autophagy-related gene 7, Atg7）、三磷酸腺苷酶6 （adenosinetriphosphatase 6, ATPase6）和60S核糖体蛋白L13 （60S ribosomal protein L13, Rpl13）相对表达量，并计算ATPase6/Rpl13。结果:与C组比较，HG组和HG+NC组ROS水平和细胞凋亡率升高（ P<0.05），细胞活力下降（ P<0.05）；与HG+NC组比较，HG+shRac1组ROS水平和细胞凋亡率降低（ P< 0.05），细胞活力升高（ P<0.05），Atg7相对表达量和BNIP3蛋白水平升高（ P<0.05），p62蛋白水平降低（ P<0.05），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ升高（ P<0.05），ATPase6/Rpl13降低（ P<0.05）。 结论:抑制Rac1可减轻高糖诱发的神经元损伤，其机制可能与增强线粒体自噬有关。

Ras相关的C3肉毒素底物1;GTP结合蛋白质;高糖;线粒体自噬;细胞凋亡

中南大学湘雅医院麻醉科，长沙　410008

[1]赵敏溪;陶媛媛;周婉晴;胡婕;刘卓懿;夏萍萍;王锷;郭曲练;叶治-.抑制Rac1表达对高糖诱发神经元损伤后线粒体自噬的影响)[J].国际麻醉学与复苏杂志,2022(06):561-565

HG+shRac1,溴化乙啶,adenosinetriphosphatase,ATPase6,Rpl13

高糖,发神经,神经元损伤,线粒体自噬,Ras,肉毒素,底物,ras,related,botulinum,toxin,substrate,对数生长期,PC12,孔板,高浓度葡萄糖,病毒抑制,HG+NC,葡萄糖浓度,DMEM,shRNA,慢病毒载体,转染,blot,微管,轻链,microtubule,associated,protein,light,chain,LC3,Bcl,腺病毒,E1B,相互作用蛋白,adenovirus,interacting,BNIP3,p62,CCK,细胞活力,流式细胞术,细胞凋亡率,细胞活性,reactive,oxygen,species,ROS,自噬相关基因,autophagy,gene,Atg7,三磷酸腺苷,60S,核糖体蛋白,L13,ribosomal,相对表达量,平降,可减轻,GTP,结合蛋白

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