目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤的作用及其可能机制.方法:利用ICA干预棕榈酸(palmitic acid,PA)培养的大鼠肾小管上皮NRK52E细胞,实验分组为对照组、PA组、PA+ICA组及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)抑制剂(AMPK inhibitor,AMPKi)处理的PA+ICA+AMPKi组.采用Western blot检测上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3)、线粒体融合蛋白1(mitochondrial fusion protein 1,MFN1)、发动蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)、caspase-1、AMPK和p-AMPK的蛋白水平;应用流式细胞术检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平;MitoTracker染色观察线粒体形态,JC-1染色观察细胞内线粒体膜电位的变化情况.结果:ICA的最佳作用浓度为5μmol/L.与对照组比较,PA组的E-cadherin、Bcl-2、MFN1和p-AMPK蛋白水平显著降低(P<0.05),α-SMA、Bax、Drp1、NLRP3、ASC、cleaved caspase-3和caspase-1的蛋白水平显著升高(P<0.05).经ICA干预后,除AMPK的变化无统计学显著性外,PA+ICA组上述指标的变化趋势均与PA组相反,且ICA干预可增加细胞内线粒体棒状结构,升高线粒体膜电位,减少ROS的产生.加入AMPK抑制剂dorsomorphin后,与PA+ICA组比较,E-cadherin蛋白水平显著降低,α-SMA、MFN1、Drp1、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平显著升高(P<0.05).结论:ICA可延缓脂肪酸所致肾小管上皮细胞间质纤维化的发生发展,其机制可能与激活AMPK、维持线粒体融合-分裂稳态及抑制ROS生成、炎症反应和细胞凋亡有关.

AMP活化蛋白激酶;肾小管上皮细胞;线粒体损伤;淫羊藿苷;细胞凋亡

吴艺璇;彭维艳;刘露;扈腊英;汤磊;周宇霞;郭兵

贵州医科大学病理生理学教研室/贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室,贵州贵阳550025;贵州省化学合成药物研发利用工程技术研究中心,贵州贵阳550025

中国病理生理杂志

[1]吴艺璇;彭维艳;刘露;扈腊英;汤磊;周宇霞;郭兵-.淫羊藿苷通过AMPK减轻脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤)[J].中国病理生理杂志,2022(01):113-121

PA+ICA,AMPKi,PA+ICA+AMPKi

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