[目的] 为验证转As6G-FFT烟草的基因功能,筛选稳定遗传的阳性株系材料,以建立基于SYBR Green的实时荧光定量PCR的转基因拷贝数检测方法.[方法] 利用PCR检测、实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)技术及生理指标分析鉴定转As6G-FFT基因阳性烟草植株,并利用基于SYBR Green的实时荧光定量PCR鉴定阳性转基因烟草中As6G-FFT基因的拷贝数.[结果] (1)基于PCR检测,14个转基因烟草叶片均能扩增出目的片段,表明14个株系中均已成功转入目的基因As6G-FFT;(2)14个转基因株系中As6G-FFT基因表达量呈极显著(P<0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中6个株系的表达量呈极其显著升高(P <0.001);且其表达量与野生型相比最高提高215.13倍;(3)基于生理指标,测定转As6G-FFT基因烟草的果聚糖含量,发现14个转基因株系中果聚糖含量呈极显著(P <0.01)或极其显著上升(P <0.001),其中13个株系的果聚糖含量极其显著升高(P <0.001);且其果聚糖含量与野生型相比最高提高10.47倍;(4)基于SYBR Green实时荧光定量PCR构建As6G-FFT和NtACT基因的标准曲线,分别为y=?0.2907x+3.0145和y=?0.2813x+8.0141,R2均为1;在检测的14个转基因株系中As6G-FFT基因拷贝数为1～3,其中1、2和3拷贝的单株数分别占总数的35.7％、50.0％和14.3％.[结论] 本研究从DNA、RNA和生理水平综合进行阳性转基因烟草的鉴定,鉴定结果更为准确.此外,还建立了基于SYBR Green实时荧光定量PCR的转基因烟草中外源As6G-FFT基因拷贝数检测方法,可用于快速、高效地估算转基因烟草中外源基因拷贝数,为后续获得稳定遗传材料提供筛选依据.

As6G-FFT基因;转基因烟草;阳性鉴定;拷贝数

青海大学农林科学院/青海省蔬菜遗传与生理重点实验室,青海 西宁 810016;省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室,青海 西宁 810016

[1]铁原毓;文军琴;田洁-.转As6G-FFT基因烟草的阳性鉴定及基因拷贝数测定)[J].福建农业学报,2022(05):592-599

As6G,NtACT,2907x+3,2813x+8

FFT,阳性鉴定,基因拷贝数,基因功能,稳定遗传,株系,SYBR,Green,Real,quantitative,qRT,生理指标分析,分析鉴定,植株,转基因烟草,草叶,转入,目的基因,基因表达量,野生型,果聚糖,糖含量,标准曲线,单株,株数,外源基因

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