典型文献
转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制
文献摘要：
截至2020年底,国际上已有19种转基因康乃馨品系进入商业化种植.为了实现转基因康乃馨的有效检测监管,研制检测标准样品十分必要.目前,国际上还没有该类标准品的相关报道.为此,本文研制了商业化时间最长、种植量较大的转基因康乃馨Moonlite品系质粒标准样品,使其与转基因康乃馨检测技术标准的应用相配套,为口岸转基因产品的检测监管提供必要的技术支撑.首先,将康乃馨内源ANS基因1279 bp片段和转基因康乃馨Moonlite品系406 bp 5'端特异性序列分别插入到pcDNA3.0载体的酶切位点和距离1 kb以上的多克隆位点上,合成质粒DNA标准样品.后将质粒DNA标准样品进行稀释、分装,对其均匀性、最小取样量和短期、长期稳定性等进行测定,采用数字PCR方法对质粒DNA标准样品进行定值,并进行不确定度评估.质粒DNA标准样品pLite经全基因组测序,与公开发布的序列完全一致.均匀性实验结果表明,分别以ANS基因和Moonlite品系特异性序列为目标进行测定,F值分别为1.61和1.14,均小于95％置信区间的F值,质粒DNA标准样品足够均匀.质粒DNA标准样品的最小取样量为2μL.稳定性实验结果表明,质粒DNA标准样品pLite在45℃高温条件下,可稳定保存14 d;在26℃及以下温度条件下,可稳定保存1个月,在4℃及以下温度可稳定保存6个月,说明质粒DNA标准样品适宜运输.质粒DNA标准样品在反复冻融25次后,拷贝数浓度无显著变化.定值结果表明,质粒DNA标准样品pLite中康乃馨内源ANS基因拷贝数的参考值为(6.13±0.22)×106μL-1,Moonlite品系特异性序列拷贝数的参考值为(6.10±0.24)×106μL-1.研制的质粒DNA标准样品pLite具有良好的均匀性和稳定性,获得国家标准样品证书后,可用于转基因康乃馨Moonlite品系的检测.
文献关键词：
转基因康乃馨;Moonlite品系;质粒标准样品
中图分类号：
作者姓名：
杨茹梦;尹璐;钱昌元;左翠花;于海燕;李想
作者机构：
上海应用技术大学 香料香精技术与工程学院,上海201418;上海海关动植物与食品检验检疫技术中心,上海200135
文献出处：
引用格式：
[1]杨茹梦;尹璐;钱昌元;左翠花;于海燕;李想-.转基因康乃馨Moonlite品系检测用质粒标准样品研制)[J].浙江农业学报,2022(08):1692-1702
A类：
转基因康乃馨,Moonlite,品系检测,质粒标准样品,pLite
B类：
标准样品研制,有效检测,检测监管,检测标准,标准品,相配套,口岸,转基因产品,ANS,bp,特异性序列,pcDNA3,酶切位点,kb,多克,克隆位点,分装,最小取样量,长期稳定性,对质,不确定度评估,全基因组测序,完全一致,品系特异性,置信区间,稳定性实验,高温条件,温度条件,反复冻融,数浓度,基因拷贝数,参考值,国家标准样品,书后
AB值：
0.17271
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