目的 探究N-乙酰半胱氨酸联合泼尼松通过抑制PKCδ的磷酸化缓解大鼠肺间质纤维化的分子机制.方法 40只6～8周龄雌性Wistar大鼠通过博来霉素构建肺损伤大鼠模型,并将其分为博来霉素(BLM)组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、N-乙酰半胱氨酸和泼尼松(NAC/Ps)组和泼尼松(Ps)组,每组10只,依次进行0.9％氯化钠溶液、80 mg/kg N-乙酰半胱氨酸、40 mg/kg N-乙酰半胱氨酸联合3 mg/kg泼尼松以及6 mg/kg泼尼松干预;另取10只正常鼠为Blank组,仅0.9％氯化钠溶液干预.21 d后对大鼠实施安乐死收集肺样本,其中一部分采用羟脯氨酸测定试剂盒、酸溶性胶原测定试剂盒和Col-Ⅰ酶联免疫吸附试验试剂盒测定羟脯氨酸、酸溶性胶原蛋白和Col-Ⅰ的含量;蛋白质印迹检测Nox4、α-SMA和Col-Ⅰ蛋白表达.另一部分进行细胞转染实验,使用Lipofectamine 2000在NIH-3T3细胞中转染靶向Nox4(Nox4-pEx-3组)和空载体pEx-3质粒(pEx-3组),以未进行任何转染的细胞作为空白对照(Blank组),转染24 h后,免疫荧光染色检测各组大鼠肺细胞NIH-3T3表达水平;蛋白质印迹检测Smad 3和p-PKC-δ蛋白表达.结果(1)BLM组大鼠肺组织中Col-Ⅰ、羟脯氨酸和酸溶性胶原蛋白含量较Blank组升高,NAC组、NAC/Ps组和Ps组大鼠肺组织中Col-Ⅰ、羟脯氨酸和酸溶性胶原蛋白含量较BLM组降低,NAC/Ps组大鼠肺组织中Col-Ⅰ、羟脯氨酸和酸溶性胶原蛋白含量较NAC组和Ps组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)BLM组大鼠肺组织中Nox4、α-SMA和Col-Ⅰ蛋白表达较Blank组升高,NAC组、NAC/Ps组和Ps组大鼠肺组织中Nox4、α-SMA和Col-Ⅰ蛋白较BLM组降低,NAC/Ps组大鼠肺组织中Nox4、α-SMA和Col-Ⅰ蛋白较NAC组和Ps组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)2个pEx-3组和2个Nox4-pEx-3组大鼠肺细胞中NIH-3T3活性较Blank组升高,NAC处理的pEx-3组和Nox4-pEx-3组大鼠肺细胞中NIH-3T3活性较非NAC的pEx-3组和Nox4-pEx-3组降低,2个pEx-3组大鼠肺细胞中NIH-3T3活性较Nox4-pEx-3组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)NAC处理组大鼠肺细胞中Smad3和p-PKC-δ表达水平较Blank组升高,Nox4-pEx-3组大鼠肺细胞中Smad3和p-PKC-δ表达水平较N-Blank组和pEx-3组降低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 N-乙酰半胱氨酸具有强效体外和体内的抗纤维化活性,其通过下调Nox4以减轻体外和体内的氧化应激,从而抑制肺纤维化中的纤维化反应,支持N-乙酰半胱氨酸联合泼尼松可能作为肺纤维化的有效抗纤维化药物组合,且PKC-δ/Smad3失活可能是N-乙酰半胱氨酸改善肺纤维化的潜在分子机制.

N-乙酰半胱氨酸;泼尼松;PKC-δ;磷酸化;肺间质纤维化

北京市大兴区人民医院呼吸与危重症科 北京 102600

[1]李阳硕;李德红;刘凡-.N-乙酰半胱氨酸联合泼尼松通过抑制PKCδ的磷酸化缓解大鼠肺间质纤维化的分子机制研究)[J].临床和实验医学杂志,2022(11):1130-1134

pEx

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