目的 探究环状LncRNA PVT1调节人晶状体上皮细胞(LECs)纤维化的作用及可能的分子机制.方法 收集新鲜晶状体前囊膜标本,包括前囊下白内障(ASC)手术眼和健康死后眼各9例.体外培养SRA01/04细胞,并分为空白组、TGFβ2组、si-control组、si-PVT1组、si-PVT1+miR-NC组、si-PVT1+miR-124-inhibitor组.除空白组外,其余各组在转染相应序列后,用5 ng·mL-1 TGFβ2作用48 h.提取组织或细胞RNA并进行微阵列分析.应用实时荧光定量PCR法检测组织样本或细胞中LncRNA PVT1、miR-124表达.采用双荧光素酶报告系统和RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP)法分析LncRNA PVT1、miR-124、Jagged-1之间的靶向关系.Western blot法检测各组细胞Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3、Snail、Slug、纤维蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)、肌动蛋白α(α-SMA)等蛋白表达.结果 LncRNA PVT1在ASC眼的前囊膜组织或TGFβ2组SRA01/04细胞中表达上调,同时miR-124表达水平降低(P<0.05),且LncRNA PVT1与miR-124表达水平均呈负相关性(P<0.05).与空白组相比,TGFβ2组和si-control组FN、α-SMA、ColⅣ、Snail、Slug蛋白表达上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组和si-PVT1+miR-NC组上述蛋白表达下调,但si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05).双荧光素酶报告系统和RIP法分析结果显示,LncRNA PVT1通过"海绵吸附"miR-124,负性调节miR-124的表达.与空白组相比,TGFβ2组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达显著上调;与TGFβ2组和si-control组比较,si-PVT1组Jagged-1、Notch-1、Notch-2、Notch-3蛋白表达下调,同时si-PVT1+miR-124-inhibitor组可逆转si-PVT1对上述蛋白表达的下调作用(P<0.05).结论 TGFβ2通过一种LncRNA PVT1依赖机制诱导LECs发生上皮—间充质转化,其机制可能是LncRNA PVT1通过"海绵吸附"miR-124负性调节其表达,进而诱导下游Jagged-1/Notch信号通路激活.

LncRNA PVT1;miR-124;Jagged-1/Notch通路;人晶状体上皮细胞;晶状体纤维化

汪涛;张振华;陈文兵;刘建军;张彩霞;吕嘉华

南京医科大学附属苏州科技城医院眼科,江苏 苏州 215153;苏州眼耳鼻喉科医院眼科,江苏 苏州215006;苏州大学附属第一医院眼科,江苏 苏州215006;上海复旦大学附属眼耳鼻喉科医院眼科,上海200031

局解手术学杂志

[1]汪涛;张振华;陈文兵;刘建军;张彩霞;吕嘉华-.LncRNA PVT1/miR-124轴靶向Jagged-1/Notch通路抑制晶状体纤维化的分子机制研究)[J].局解手术学杂志,2022(09):774-781

晶状体纤维化,PVT1+miR

LncRNA,Jagged,Notch,人晶状体上皮细胞,LECs,前囊膜,白内障,ASC,体外培养,SRA01,TGF,si,control,NC,inhibitor,转染,微阵列分析,双荧光素酶报告系统,结合蛋白,免疫共沉淀,RIP,blot,Snail,Slug,纤维蛋白,FN,胶原蛋白,Col,肌动蛋白,SMA,平降,海绵吸附,负性

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