典型文献
Smarcad1重组蛋白表达及多克隆抗体验证
文献摘要：
目的:建立稳定的实验室多克隆抗体制备流程,选择Smarcad1作为目的基因进行重组蛋白表达纯化与多克隆抗体制备,并对其进行特异性验证.方法:以本实验室的pcDNA3.1-Flag-Smarcad1质粒作为模板,构建pET-16b-Smarcad1-F1原核表达质粒.表达Smarcad1-F1蛋白,并纯化.利用蛋白质免疫印迹,蛋白质免疫共沉淀和免疫荧光实验检测抗体特异性.结果:PCR鉴定结果显示,成功构建pET-16b-Smarcad1-F1表达质粒.蛋白表达纯化实验中,考马斯亮蓝染色检测,相较于诱导前,加入IPTG后Smarcad1蛋白成功诱导表达,且纯化出分子量为27 kD的目的蛋白.Western印迹证明,制备的抗体能够特异性识别内源性Smarcad1蛋白.蛋白质免疫共沉淀实验显示,相较于对照组,制备的抗体能够与Smarcad1蛋白结合.免疫荧光实验检测所制备抗体的特异性,结果显示制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白.结论:成功构建了Smarcad1原核表达质粒,利用原核蛋白表达纯化出Smarcad1蛋白,利用该蛋白制备的抗体可以特异性识别内源性Smarcad1蛋白,为后续原核表达蛋白及多克隆抗体制备提供思路.
文献关键词：
基因克隆;原核蛋白表达与纯化;多克隆抗体制备
中图分类号：
作者姓名：
秦万昌;黄书奇;胡德庆
作者机构：
天津医科大学基础医学院细胞生物学系,天津300070
文献出处：
引用格式：
[1]秦万昌;黄书奇;胡德庆-.Smarcad1重组蛋白表达及多克隆抗体验证)[J].天津医科大学学报,2022(06):598-601,608
A类：
Smarcad1,16b,原核蛋白表达与纯化
B类：
重组蛋白表达,多克隆抗体制备,目的基因,表达纯化,pcDNA3,Flag,质粒,pET,原核表达,蛋白质免疫印迹,免疫共沉淀,免疫荧光,实验检测,检测抗体,抗体特异性,化实验,考马斯亮蓝,蓝染,IPTG,诱导表达,分子量,kD,目的蛋白,特异性识别,内源性,蛋白结合,白及,基因克隆
AB值：
0.171078
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