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改良原代大鼠骨源间充质干细胞的体外培养方法及鉴定
文献摘要：
目的 改良原代大鼠骨源间充质干细胞体外分离培养方法,以获得纯度高、增殖活力强、分化潜能大的理想工程细胞.方法 基于"仿原位生态培养"方法及原理,剪取大鼠前后肢股骨、胫骨,剔除附着的肌肉、筋膜组织,完全不用冲洗骨髓腔,直接将其剪碎成约1mm3骨块后,移入0.1％Ⅱ型胶原酶中消化90 min;经洗涤、离心后,接种于培养皿中进行原代培养.当细胞融合度达80％～90％时,予0.25％胰蛋白酶消化液进行二次消化,按1∶3比例进行传代培养.采用流式细胞仪检测第4代细胞表面CD分子标志物,并进行成脂、成骨诱导分化实验.结果 接种48 h后,少量长梭形细胞从骨块周围爬出;96h后,细胞逐渐融合成片;传至第4代时,细胞形态均一,以"成纤维样"细长梭形为主,融合后呈"涡旋式"生长,具有一定方向性;传至第10代,细胞形态仍基本保持不变.流式细胞仪检测结果提示CD44、CD90和CD29表达阳性,CD34、CD11b/c和CD45呈阴性表达;成脂、成骨诱导分化实验均为阳性.结论 基于"仿原位生态培养"原理,采用组织块结合酶消化法,能够简单、高效分离培养出大鼠骨源间充质干细胞,值得推广.
文献关键词：
骨;间充质干细胞;原代培养;仿原位生态培养;组织块结合酶消化法;免疫表型;细胞分化
中图分类号：
作者姓名：
刘海琴;马华根;唐元瑜
作者机构：
福建中医药大学中西医结合学院,福州350122;北京中医药大学中医学院,北京102488;福建中医药大学中医学院,福州350122
文献出处：
引用格式：
[1]刘海琴;马华根;唐元瑜-.改良原代大鼠骨源间充质干细胞的体外培养方法及鉴定)[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2022(01):61-67
A类：
仿原位生态培养,1mm3,组织块结合酶消化法
B类：
间充质干细胞,体外培养,培养方法,细胞体,外分,分离培养,增殖活力,分化潜能,工程细胞,剪取,后肢,股骨,胫骨,筋膜,不用,冲洗,骨髓腔,碎成,成约,骨块,移入,胶原酶,经洗,洗涤,培养皿,原代培养,细胞融合,融合度,胰蛋白酶,消化液,传代培养,流式细胞仪,细胞表面,分子标志物,成脂,成骨诱导分化,化实验,梭形细胞,爬出,96h,成片,代时,细胞形态,均一,细长,涡旋式,方向性,CD44,CD90,CD29,表达阳性,CD34,CD11b,CD45,高效分离,免疫表型,细胞分化
AB值：
0.411822
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