典型文献
猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定
文献摘要：
目的 探索一种简单方便、重复性好的非人灵长类动物原代肾小球系膜细胞(GMCs)体外提取、培养及鉴定的方法.方法 在无菌条件下取出猕猴肾脏,利用两种不同孔径的纱网(介于100目到200目之间)分离出肾小球,设置不同浓度(0.1、0.2 mg/ml)Ⅵ型胶原酶消化肾小球,同时在这两个浓度基础上设置不同消化时间(10、15 min),将消化后的肾小球接种到细胞瓶中,观察不同消化条件下GMCs的生长状况.显微镜下观察GMCs的结构,免疫荧光和Western blot法检测GMCs中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Nephrin蛋白的表达.利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)刺激后观察GMCs生物学特性,CCK-8法和高内涵细胞成像系统法分别检测GMCs活力和增殖情况;Transwell法和细胞划痕实验检测GMCs迁移能力.结果 利用0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min搜集到的肾小球贴壁较多,肾小球细胞生长状态较好.原代培养的肾小球3 d贴壁,7 d开始移出不规则形状或星状的细胞,经21～35 d GMCs逐渐铺满瓶底.GMCs中 α-SMA蛋白阳性,Nephrin蛋白阴性.10 ng/ml TNF-α体外刺激能显著增强GMCs的增殖与迁移能力.结论 利用胶原酶消化法(0.1 mg/mlⅥ型胶原酶消化10 min)成功建立了GMCs的分离及培养的方法体系,为之后更好模拟人类肾脏疾病提供合适的细胞模型.
文献关键词：
猕猴;肾小球系膜细胞;原代细胞培养;胶原酶消化法
中图分类号：
作者姓名：
刘潇一;张春梅;张磊;许振;魏琦;蒋海峰;董婷玉;杨雪枝;严尚学;常艳;魏伟
作者机构：
安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药物教育部重点实验室,抗炎免疫药物安徽省协同创新中心,安徽医科大学类风湿关节炎研究中心,合肥 230032
文献出处：
引用格式：
[1]刘潇一;张春梅;张磊;许振;魏琦;蒋海峰;董婷玉;杨雪枝;严尚学;常艳;魏伟-.猕猴原代肾小球系膜细胞分离提取培养与鉴定)[J].安徽医科大学学报,2022(08):1222-1228
A类：
GMCs
B类：
猕猴,肾小球系膜细胞,细胞分离,分离提取,提取培养,单方,非人灵长类动物,无菌,不同孔径,ml,消化时间,生长状况,显微镜下,免疫荧光,blot,平滑肌肌动蛋白,SMA,Nephrin,后观,生物学特性,CCK,高内涵,细胞成像,成像系统,系统法,Transwell,细胞划痕实验,实验检测,迁移能力,贴壁,细胞生长,生长状态,原代培养,移出,不规则形状,星状,铺满,瓶底,白阳,胶原酶消化法,方法体系,拟人,肾脏疾病,细胞模型,原代细胞培养
AB值：
0.26316
相似文献
机标中图分类号，由域田数据科技根据网络公开资料自动分析生成，仅供学习研究参考。
