目的 使用不同浓度消化酶制备大鼠膈肌单细胞悬液,筛选最佳消化酶浓度组合.方法 将胰蛋白酶稀释为0.125％、0.250％、0.375％、0.500％、0.625％,胶原酶Ⅰ型稀释为0.050％、0.100％、0.150％、0.200％、0.250％,胶原酶Ⅳ型稀释为0.050％、0.100％、0.150％、0.200％、0.250％,将三种消化酶按照浓度从低到高依次组合为五个浓度组,即胰蛋白酶0.125％+胶原酶Ⅰ0.050％+胶原酶Ⅳ0.050％、胰蛋白酶0.250％+胶原酶Ⅰ0.100％+胶原酶Ⅳ0.100％、胰蛋白酶0.375％+胶原酶Ⅰ0.150％+胶原酶Ⅳ0.150％、胰蛋白酶0.500％+胶原酶Ⅰ0.200％+胶原酶Ⅳ0.200％、胰蛋白酶0.625％+胶原酶Ⅰ0.250％+胶原酶Ⅳ0.250％.取SD大鼠新鲜膈肌组织,分成A、B、C、D、E组,采用机械—酶消化法制备膈肌单细胞悬液,分别加入上述五种浓度组合的消化酶进行消化;另设对照组,加入等量PBS.单细胞悬液经台盼蓝染色,观察悬液中细胞的形态,计数活细胞数、死细胞数、细胞团块数,计算细胞存活率和单细胞悬液浓度;经Anti-Rat CD11b PE标记后进行流式细胞术检测,获得目标细胞比值,比较各组检测结果.结果 A～E组获得的活细胞数分别为156.00×105、200.92×105、182.08×105、160.00×105、140.02×105/mL,细胞存活率分别为87.01％、90.02％、91.86％、90.75％、86.94％,单细胞悬液浓度分别为19.50×105、30.25×105、22.75×105、20.00×105、17.50×105/mL,均高于对照组(P均<0.05),其中B、C组活细胞数量和单细胞悬液浓度高于其他三组(P均<0.05).经CD11b标记后,C组D11b阳性的中性粒细胞数、CD11b阳性细胞占活细胞的百分比均高于其他各组(P均<0.05).结论 采用机械—酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液,不同消化酶浓度组合均能获得优质的单细胞悬液,其中以胰蛋白酶0.375％+胶原酶Ⅰ0.150％+胶原酶Ⅳ0.150％获得的单细胞悬液细胞存活率最高、死细胞数最少.

膈肌;单细胞悬液;消化酶;最佳作用浓度;流式细胞术;动物实验

何杰;王宁;张杉杉;刘青铃;周舟;陈谡;吴学东

攀枝花学院附属医院普外科,四川攀枝花617000;大理大学第一附属医院小儿外科

山东医药

[1]何杰;王宁;张杉杉;刘青铃;周舟;陈谡;吴学东-.机械—酶消化法制备大鼠膈肌单细胞悬液的最佳消化酶浓度组合筛选)[J].山东医药,2022(26):45-48

D11b

酶消化法,膈肌,单细胞悬液,消化酶,胰蛋白酶,胶原酶,肌组织,别加,等量,PBS,台盼蓝,蓝染,活细胞,团块,细胞存活率,Anti,Rat,CD11b,PE,流式细胞术,细胞数量,阳性细胞,最佳作用浓度,动物实验

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