目的 探究微小核糖核酸(microRNAs,miRNA,miR)-203a-3p对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测HCC细胞、人正常肝细胞以及临床HCC组织中miR-203a-3p相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测miR-203a-3p对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p的潜在靶基因(GLS1),双荧光素酶实验进行验证;探究HCC细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1)对HCC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹(Western blot)实验检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc表达.结果 HCC癌组织中miR-203a-3p(0.32±0.07)表达明显低于癌旁正常组织(1.02±0.03),差异有统计学意义(t=41.105,P<0.001);HCC细胞HepG2(0.34±0.05),HCCLM3(0.58±0.06),Huh7(0.43±0.05),Hep3B(0.29±0.04)中miR-203a-3p相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2(1.01±0.02)中miR-203a-3p表达,差异有统计学意义(F=119.080,P<0.001).与Blank组相比,miR-203a-3p过表达组HCC细胞增殖(0.61±0.05 vs 1.24±0.06),迁移率(21.43％±2.01％vs 60.22％±3.14％)及侵袭能力(76.54±13.56 vs 221.06±16.54)均明显降低,差异有统计学意义(t=14.849,13.900,10.562,均P<0.001).GLS1是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p靶向负调控GLS1表达.HCC细胞中GLS1高表达呈现高酶活性,HCC细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性.GLS1抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank组和siRNA-NC组明显降低,差异有统计学意义(F=64.754,35.627,均P<0.001).GLS1抑制组细胞增殖(0.59±0.04)、迁移率(30.15％±1.02％)和侵袭能力(69.59±15.74)较Blank组明显降低(1.29±0.07,59.67％±1.45％,202.14±13.52),差异均有统计学意义(t=16.499,16.278,11.215,均P<0.001).miR-203a-3p过表达和GLS1表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β和c-Myc的表达,差异均有统计学意义(t=11.129～28.213,均P<0.001).转染GLS1可逆转miR-203a-3p对HCC细胞生物学行为及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白表达的抑制作用.结论 HCC中miR-203a-3p显著低表达,其过表达能够抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p靶向GLS1调控Wnt/β-catenin信号通路活性有关.

肝细胞癌;微小核糖核酸-203a-3p;肾型谷氨酰胺酶;增殖;迁移;侵袭;谷氨酰胺代谢;Wnt/β-catenin通路

时晓晓;董翔;于若卉;苏君君;齐东东;白杨;董猛

河北省沧州中西医结合医院肝胆外二科,河北沧州 061000;河北省沧州中西医结合医院耳鼻咽喉科,河北沧州 061000

现代检验医学杂志

[1]时晓晓;董翔;于若卉;苏君君;齐东东;白杨;董猛-.miR-203a-3p靶向GLS1调控HCC细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究)[J].现代检验医学杂志,2022(05):86-92,122

肾型谷氨酰胺酶

203a,3p,GLS1,微小核糖核酸,microRNAs,miRNA,肝细胞癌,hepatocellular,carcinoma,quantitative,real,qRT,人正常肝细胞,相对表达,细胞划痕实验,Transwell,靶基因,双荧光素酶,glutaminase,蛋白免疫印迹,blot,实验检测,Wnt,catenin,关键蛋白,GSK,Myc,癌组织,癌旁,正常组织,HepG2,HCCLM3,Huh7,Hep3B,LO2,Blank,过表达,迁移率,侵袭能力,负调控,表达呈现,KG,谷氨酸,siRNA,NC,表达抑制,转染,细胞生物学行为,低表达,细胞的增殖,迁移和侵袭,谷氨酰胺代谢

0.203659