目的 检测微小核糖核酸(micro RNA,miR)-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达,并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR法(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达.选择MG-63细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染空白对照(control)、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组(miR-21-inhibitor),再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达.CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响;Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中PTEN,PI3K,AKT及p-AKT蛋白表达的影响.结果 人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-63中miR-21相对表达水平分别为1.29±0.14,1.75±0.21和2.12±0.25,较人正常骨细胞hFOB 1.19中miR-21表达水平(0.75±0.12)显著升高,差异具有统计学意义(F=38.037,P=0.002).转染抑制剂培养48h后,与Control组miR-21表达水平(2.07±0.28)和miR-21-NC组miR-21表达水平(2.02±0.33)相比,miR-21-inhibitor组miR-21表达水平(1.07±0.15)显著下降,差异具有统计学意义(F=33.357,P=0.005).CCK-8结果表明,与Control组和miR-21-NC组相比,miR-21-inhibitor组各个时间点A值均显著下降,差异具有统计学意义(F=71.409～378.281,均P<0.001).流式细胞检测结果表明,miR-21-inhibitor组凋亡数占比为45.0％,较Control组(8.65％)和miR-21-NC组(10.60％)均有增加,差异有统计学意义(F=56.134,P<0.001).Transwell实验结果显示,miR-21-inhibitor组细胞穿膜数(102±9个)较Control组细胞穿膜数(189±12个)及miR-21-NC组细胞穿膜数(177±16个)明显减少,差异有统计学意义(F=158.781,F<0.001).Western blot结果表明,miR-21-inhibitor组PTEN表达上调,PI3K和p-AKT表达下调,差异均有统计学意义(F=86.309～138.615,均P<0.001),但对AKT蛋白表达无明显影响,差异无统计学意义(F=14.527,P=0.152).结论 miR-21在人骨肉瘤细胞系中呈高表达,抑制miR-21表达可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭,促进其凋亡,作用机制可能与PTEN/PI3K/AKT通路有关.

骨瘤细胞;微小核糖核酸-21;PTEN/PI3K/AKT通路;增殖和侵袭;凋亡

内蒙古自治区巴彦淖尔市医院脊柱外科,内蒙古巴彦淖尔 015000

[1]姜富祥;阿尔宾;高飞;王兴-.miR-21靶向调控PTEN/PI3K/AKT通路对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响)[J].现代检验医学杂志,2022(04):18-22

骨瘤细胞

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