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新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定
文献摘要：
研究旨在克隆新的四氢嘧啶合成基因簇,并对其功能进行鉴定,为应用于四氢嘧啶的生产奠定基础.从新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中克隆获得四氢嘧啶合成基因簇ectABC,ectABC与表达载体pBAD连接后转化至大肠杆菌BW25113中,通过L-阿拉伯糖诱导表达.采用SDS-PAGE和液质联用鉴定重组表达蛋白,利用全细胞催化合成四氢嘧啶,通过高分辨质谱鉴定四氢嘧啶,并从天冬氨酸浓度、KCl浓度、温度和pH 4个方面优化催化条件.结果表明,来自新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2基因组的ectABC大小为2235 bp.SDS-PAGE显示表达产物中有3个重组蛋白产生,液质联用鉴定表明其分子量分别与ectA、ectB、ectC的理论分子量一致.高分辨质谱分析发现全细胞催化上清中有四氢嘧啶产生.优化后的最适全细胞催化条件为:天冬氨酸浓度100 mmol·L-1,KCl浓度100 mmol·L-1,温度30℃,pH 7.0,最优条件下产量为1.11 mg·mL-1.研究从弧菌中克隆了四氢嘧啶合成基因簇ectABC,并在大肠杆菌BW25113中实现了异源表达和低盐环境下的四氢嘧啶合成,为大规模发酵生产四氢嘧啶奠定了基础.
文献关键词：
新喀里多尼亚弧菌;ectABC基因簇;重组表达;全细胞催化;四氢嘧啶
中图分类号：
作者姓名：
谭琳;NWE Ni Win Htet;陈偿;PAN Zhiqiang
作者机构：
中国热带农业科学院海口实验站,海口 571101;缅甸生物技术研究所微生物实验室,缅甸 皎施 05151;中国科学院南海海洋研究所,热带海洋生物资源和生态重点实验室,广州 510301;美国农业部农业研究局天然产物利用研究中心,美国 牛津 38677-1848
文献出处：
引用格式：
[1]谭琳;NWE Ni Win Htet;陈偿;PAN Zhiqiang-.新喀里多尼亚弧菌CGJ02-2中四氢嘧啶合成基因簇ectABC的克隆及其功能鉴定)[J].生物技术进展,2022(06):915-921
A类：
新喀里多尼亚,新喀里多尼亚弧菌,喀里多尼亚,CGJ02,ectABC,ectA,ectB,ectC
B类：
四氢嘧啶,基因簇,功能鉴定,表达载体,pBAD,大肠杆菌,BW25113,阿拉伯糖,诱导表达,SDS,PAGE,液质联用,重组表达,全细胞催化,催化合成,高分辨质谱,质谱鉴定,天冬氨酸,酸浓度,KCl,自新,bp,达产,重组蛋白,分子量,质谱分析,上清,最优条件,异源表达,低盐
AB值：
0.165753
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