典型文献
外周血T淋巴细胞亚群流式检测方法的优化及验证
文献摘要：
为优化外周血T淋巴细胞亚群流式检测方法,采集小鼠肝素钠抗凝血,用FITC rat anti-mouse CD3、APC rat anti-mouse CD4和PE rat anti-mouse CD8a荧光抗体进行染色,裂解红细胞,通过流式细胞仪检测各亚类细胞占淋巴细胞百分比.从样本体积(50 μL和 100 μL)、FITC rat anti-mouse CD3 抗体的工作浓度(1.25～40.00μg·mL-1)、APC rat anti-mouse CD4抗体的工作浓度(0.625～20.000 μg.mL-1)、PE rat anti-mouse CD8a抗体的工作浓度(1.25～40.00μg·mL-1)及红细胞裂解条件(时间和裂解次数)等方面对检测方法进行了优化,并验证方法的精密度(批内差异和批间差异);同时对样品4℃放置24 h、室温放置24 h、染色处理后4℃放置24 h的稳定性进行验证.结果表明,50 μL抗凝血中加入终浓度1.25 μg·mL-1 FITC rat anti-mouse CD3、1.25μg·mL-1APC rat anti-mouse CD4 和 5.00 μg·mL-1 PE rat anti-mouse CD8a,室温避光孵育 30 min,加入红细胞裂解液,裂解5 min,用磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)终止裂解后,重复裂解1次,再用PBS重悬后上机检测,批内差异和批间差异均＜15％,符合标准.染色处理后样品4℃放置24 h可保持稳定性.对流式检测小鼠外周血T细胞亚群的基本方法进行全面优化及验证,旨在为临床前免疫毒性评价提供研究方法和实验数据,以及为流式细胞术分析临床血液淋巴细胞免疫表型的方法学研究提供参考依据.
文献关键词：
流式细胞术;外周血T淋巴细胞亚群;优化
中图分类号：
作者姓名：
李新;王园园;侯婉毅;李思佳;江魁;赵云霞
作者机构：
华兰基因工程有限公司,河南新乡453003
文献出处：
引用格式：
[1]李新;王园园;侯婉毅;李思佳;江魁;赵云霞-.外周血T淋巴细胞亚群流式检测方法的优化及验证)[J].生物技术进展,2022(05):786-792
A类：
CD8a,1APC
B类：
淋巴细胞亚群,化外,肝素钠,抗凝血,FITC,rat,anti,mouse,CD3,CD4,PE,荧光抗体,过流,流式细胞仪,亚类,淋巴细胞百分比,验证方法,精密度,染色处理,避光,孵育,磷酸盐缓冲液,phosphate,buffer,saline,PBS,止裂,上机,符合标准,基本方法,全面优化,免疫毒性,毒性评价,流式细胞术,淋巴细胞免疫,免疫表型,方法学研究
AB值：
0.247843
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