目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对加速纤维肉瘤蛋白(Raf)/丝裂原活化的细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的调控作用,及对血小板源生长因子(PDGF)诱导的气道上皮细胞转分化(EMT)的影响.方法 取人气道上皮细胞株16-HBE,分为对照组、PDGF不同浓度刺激组(5、25、50、100、200 ng/L),用免疫荧光法检测各组细胞EMT标志物波形蛋白(vimentin)阳性表达,选出合适的PDGF诱导浓度.将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组(100 ng/L)、AngⅡ不同浓度组(10-7、10-6、10-5 mol/L),用倒置显微镜检测细胞形态;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞EMT相关蛋白E-粘钙素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、vimentin,气道纤维化相关蛋白-纤维连接蛋白(FN)、胶原蛋白Ⅳ(ColⅣ),Raf/MEK/ERK通路相关蛋白Raf、MEK及磷酸化水平(p-MEK)、ERK及磷酸化水平(p-ERK)、转化生长因子β1(TGF-β1)等蛋白相对表达水平.将16-HBE细胞分为正常对照组、PDGF诱导组、AngⅡ组(10-6 mol/L)、Raf/MEK/ERK通路抑制剂(sorafenib)组(10μmoL/L)、AngⅡ+sorafenib(10-6 mol/L+10μmol/L)组,检测细胞形态及Raf/MEK/ERK通路相关蛋白表达.结果 PDGF不同浓度处理下,细胞vimentin阳性表达随浓度升高逐渐升高,并在100～200 ng/L时上升至稳定水平,选取100 ng/L为诱导浓度.AngⅡ不同浓度处理后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,细胞呈长梭形等改变,E-cadherin表达降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05);与PDGF诱导组比较,AngⅡ不同浓度处理组细胞长梭形改变进一步加重,E-cadherin表达进一步降低(P<0.05),α-SMA、vimentin、FN、ColⅣ、Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),且AngⅡ浓度10-6 mol/L组及10-5 mol/L浓度组上述指标变化优于10-7 mol/L组,AngⅡ浓度10-6 mol/L组与10-5 mol/L浓度组比较差异无统计学意义(P>0.05).AngⅡ与sorafenib联合应用后,与正常对照组比较,PDGF诱导组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达升高(P<0.05).与PDGF诱导组相比,AngⅡ组细胞紧密连接减少,长梭形改变较多,Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达进一步升高(P<0.05),sorafenib组Raf、p-MEK/MEK、p-ERK/ERK、TGF-β1蛋白表达降低(P<0.05).AngⅡ+sorafenib组上述指标变化与AngⅡ组相反,且差异有统计学意义(P<0.05).结论 AngⅡ可通过激活Raf/MEK/ERK通路表达,促进PDGF诱导的气道上皮细胞EMT进程.

血管紧张素Ⅱ;气道上皮细胞;加速纤维肉瘤蛋白;丝裂原活化的细胞外信号调节激酶;细胞外信号调节激酶;血小板源生长因子;转分化

杨丹芬;谢圆媛;康睿

716000 陕西省延安市,延安大学附属医院老年病科;716000 陕西省延安市,延安大学附属医院呼吸内科

河北医药

[1]杨丹芬;谢圆媛;康睿-.血管紧张素Ⅱ通过Raf/MEK/ERK通路对PDGF诱导的气道上皮细胞转分化的影响)[J].河北医药,2022(08):1141-1146

加速纤维肉瘤蛋白,+sorafenib,L+10

血管紧张素,Raf,MEK,ERK,PDGF,上皮细胞转分化,Ang,丝裂原活化的细胞外信号调节激酶,血小板源生长因子,EMT,人气道上皮细胞,细胞株,HBE,免疫荧光法,波形蛋白,vimentin,阳性表达,正常对照,倒置,显微镜检测,细胞形态,蛋白免疫印迹法,blot,cadherin,平滑肌肌动蛋白,SMA,纤维连接蛋白,FN,胶原蛋白,Col,磷酸化,转化生长因子,TGF,白相,相对表达,通路抑制剂,moL,稳定水平,细胞紧密连接,指标变化,联合应用

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