目的 探讨miRNA-652在血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖中的作用及可能机制.方法 本实验时间为2019年1月至2020年7月.采用不同浓度(0、1、10、100 nmol/L)的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激VSMCs 24 h后,检测miRNA-652表达情况,确定10 nmol/L AngⅡ为最佳刺激浓度.采用10 nmol/L AngⅡ分别刺激VSMCs 0、6、12、24 h后,检测miRNA-652表达情况,确定AngⅡ最佳刺激时间为24 h.将VSMCs随机分为miRNA-652模拟物组、模拟物对照组、miRNA-652抑制剂组、抑制剂对照组,分别转染miRNA-652 agomir、agomir NC、miRNA-652 antagomir及antagomir NC 24 h/48 h.采用qRT-PCR检测VSMCs中miRNA-652、NPTN mRNA相对表达量,采用CCK8试剂盒检测细胞增殖能力(相对吸光度).通过miRNA靶基因预测数据库miRDB、TargetScan、miRTarBase在线进行生物信息学分析.为了验证NPTN是miRNA-652的靶基因,将含有miRNA-652结合位点的NPTN 3'UTR克隆到报告基因载体pmirGLO中,构建野生型pmirGLO-NPTN 3'UTR-WT和突变型pmirGLO-NPTN 3'UTR-MUT,并分别与寡核苷酸miRNA-652 agomir、miRNA-652 antagomir、agomir NC及antagomir NC共转染293 T细胞,转染48 h后测定荧光素酶相对活性.结果 转染24 h后,miRNA-652模拟物组miRNA-652相对表达量高于模拟物对照组,相对吸光度低于模拟物对照组(P<0.05);miRNA-652抑制剂组miRNA-652相对表达量低于抑制剂对照组,相对吸光度高于抑制剂对照组(P<0.05).生物信息学分析结果显示,3个数据库均检测到NPTN是miRNA-652的靶基因.双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染48 h后,miRNA-652模拟物组pmirGLO-NPTN 3'UTR-WT荧光素酶相对活性低于模拟物对照组(P<0.05).转染48 h后,miRNA-652模拟物组NPTN mRNA相对表达量低于模拟物对照组,miRNA-652抑制剂组NPTN mRNA相对表达量高于抑制剂对照组(P<0.05).结论 过表达miRNA-652可以抑制VSMCs增殖,而抑制miRNA-652可以促进VSMCs增殖;miRNA-652对NPTN具有负调控作用,其可能通过调控靶基因NPTN而影响VSMCs增殖.

心血管疾病;miRNA-652;血管平滑肌细胞;细胞增殖

谭娟娟;姚庆苹;党琳;严志强

712046 陕西省咸阳市,陕西中医药大学整合医学研究院陕西省中西医结合心血管病防治重点实验室;201400 上海市,上海交通大学附属第六人民医院南院中心实验室;200240 上海市,上海交通大学生命科学技术学院;712046 陕西省咸阳市,陕西中医药大学基础医学院

实用心脑肺血管病杂志

[1]谭娟娟;姚庆苹;党琳;严志强-.miRNA-652在血管平滑肌细胞增殖中的作用及可能机制)[J].实用心脑肺血管病杂志,2022(07):86-90,95

NPTN

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