目的 探究三结构域蛋白44(TRIM44)对子宫内膜癌(EC)细胞生长和放疗敏感性的调控机制.方法 ①通过免疫组化检测30例EC患者的癌组织和临近癌旁组织中TRIM44的表达水平.通过qRT-PCR检测癌旁组织以及不同FIGO分期、不同组织学分级、淋巴结转移/未转移的EC患者癌组织中TRIM44 mRNA水平.②将人子宫内膜癌细胞系(HEC-1 A)分为对照组、siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组和LV-TRIM44组,根据分组情况,使用Lipofectamine 2000试剂将阴性对照siRNA(siRNA-NC)、靶向TRIM44的siRNA(siRNA-TRIM44)、阴性对照慢病毒(LV-NC)和TRIM44过表达慢病毒(LV-TRIM44)转染到对应分组的HEC-1 A细胞中,对照组细胞不进行转染,通过qRT-PCR和Western blot检测各组细胞中TRIM44的mRNA和蛋白表达水平.③将HEC-1 A细胞分为siRNA-NC组、siRNA-TRIM44组、LV-NC组、LV-TRIM44组、8 Gy+siRNA-NC组、8 Gy+siRNA-TRIM44组、8 Gy+LV-NC组、8 Gy+LV-TRIM44组.根据分组情况,使用Lipofectamine 2000试剂转染细胞,并采用直线加速器6-MV X射线照射细胞(8 Gy).通过CCK-8测定细胞增殖,AnnexinⅤ-FITC凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡,Transwell检测细胞迁移和侵袭,qRT-PCR和Western blot检测TRIM44、p62、细丝蛋白A(FLNA)和RAD51的表达.结果 与癌旁组织相比,癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=8.906,P<0.001).与FIGO分期Ⅰ+Ⅱ期相比,Ⅲ+Ⅳ期癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=3.943,P<0.001).与组织学分级G1级相比,G2+G3级癌组织中TRIM44的mRNA表达水平显著升高(t=4.046,P<0.001).与淋巴结未转移的患者相比,转移患者癌组织中TRIM44 mRNA表达水平显著升高(t=4.576,P<0.001).与siRNA-NC组相比,siRNA-TRIM44组相对细胞活力、迁移和侵袭细胞数量均降低,而凋亡率升高(P<0.05).与siRNA-NC组相比,siRNA-TRIM44组和8 Gy+siRNA-NC组细胞核P62蛋白相对表达量均升高,而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05).与8 Gy+siRNA-NC组相比,8 Gy+siRNA-TRIM44组细胞核P62蛋白相对表达量升高,而细胞核FLNA和RAD51蛋白相对表达量均降低(P<0.05).结论 TRIM44的高表达促进了EC细胞的增殖和转移,TRIM44的高表达抑制了p62的核转位,从而无法降解细胞核内FLNA和RAD51,导致DNA修复增加、癌细胞活性和放疗抗性升高.

子宫内膜癌;三结构域蛋白44;放疗敏感性;DNA损伤修复;p62;细丝蛋白A;RAD51

王丽;陆军;刘金鹏;万伟;秦少磊;张雅敏

西安国际医学中心医院肿瘤五病区,西安 710100;西安国际医学中心医院肿瘤三病区

山西医科大学学报

[1]王丽;陆军;刘金鹏;万伟;秦少磊;张雅敏-.TRIM44基因对子宫内膜癌细胞生长及放疗敏感性的影响)[J].山西医科大学学报,2022(11):1391-1401

TRIM44,Gy+siRNA,Gy+LV,G2+G3

对子,细胞生长,放疗敏感性,三结构域蛋白,调控机制,免疫组化检测,癌组织,癌旁组织,qRT,FIGO,不同组织,组织学分级,淋巴结转移,人子宫内膜癌细胞,细胞系,HEC,NC,Lipofectamine,慢病毒,过表达,转染,blot,蛋白表达水平,直线加速器,MV,CCK,Annexin,FITC,凋亡检测,检测试剂盒,Transwell,细胞迁移和侵袭,p62,细丝,丝蛋白,FLNA,RAD51,G1,细胞活力,细胞数量,凋亡率,细胞核,P62,白相,相对表达量,细胞的增殖,表达抑制,核转位,细胞活性,损伤修复

0.16526