目的:通过激活或阻断内向整流钾通道2.1(inwardly-rectifying potassium channel 2.1,Kir2.1),检测巨噬细胞M1/M2型极化标志物及相关细胞因子的改变,探讨Kir2.1在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)诱导的巨噬细胞M1/M2型极化过程中的具体作用.方法:采用RAW264.7小鼠巨噬细胞系,将未转染慢病毒的RAW264.7细胞分为对照(control)组、LPS组、IL-4组、LPS+zacopride(Kir2.1选择性激动剂)组及IL-4+ML133(Kir2.1选择性阻断剂)组,将转染慢病毒的RAW264.7细胞分为vector组、LPS+vector组、IL-4+vector组、KD-shKir2.1组、LPS+KD-shKir2.1组及IL-4+KD-shKir2.1组.应用ELISA技术检测巨噬细胞培养液上清中IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的浓度;应用实时荧光定量PCR技术检测巨噬细胞中Kir2.1、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、CD86、CD206、IL-6及TNF-α的mRNA表达;应用细胞免疫荧光技术和Western blot技术检测巨噬细胞中Kir2.1、iNOS、CD86及CD206的定位和表达.结果:Kir2.1在RAW264.7细胞的胞膜及胞质中均有表达,并且LPS干预RAW264.7细胞后Kir2.1的蛋白表达显著下降(P<0.01),IL-4干预巨噬细胞后Kir2.1的蛋白表达显著升高(P<0.01).激活Kir2.1能够显著减少炎症细胞因子的释放(P<0.05或P<0.01),降低M1型极化标志物iNOS和CD86的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),而阻断或敲减Kir2.1能够显著增加炎症细胞因子的释放(P<0.05或P<0.01),升高M1型极化标志物iNOS和CD86的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),降低M2型极化标志物CD206的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论:激活Kir2.1能够抑制LPS诱导的巨噬细胞向M1型极化;而阻断或敲减Kir2.1能够促进LPS诱导的巨噬细胞向M1型极化,抑制IL-4诱导的巨噬细胞向M2型极化.

巨噬细胞极化;内向整流钾通道;炎症;动脉粥样硬化

王璐;杨瑞;张莹莹;李新芝;马克涛

石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学医学院第一附属医院国家卫健委中亚高发病防治重点实验室,新疆石河子832000;石河子大学医学院生理学教研室,新疆石河子832000;石河子大学医学院病理生理学教研室,新疆石河子832000

中国病理生理杂志

[1]王璐;杨瑞;张莹莹;李新芝;马克涛-.Kir2.1在LPS或IL-4诱导的巨噬细胞M1/M2型极化中的作用)[J].中国病理生理杂志,2022(03):385-393

内向整流钾通道,inwardly,LPS+zacopride,4+ML133,LPS+vector,4+vector,shKir2,LPS+KD,4+KD

M1,M2,rectifying,potassium,channel,脂多糖,lipopolysaccharide,interleukin,极化过程,具体作用,RAW264,小鼠巨噬细胞,巨噬细胞系,转染,慢病毒,control,激动剂,阻断剂,细胞培养,培养液,上清,tumor,necrosis,诱导型一氧化氮合酶,inducible,nitric,oxide,synthase,iNOS,CD86,CD206,细胞免疫,免疫荧光技术,blot,胞膜,炎症细胞因子,敲减,巨噬细胞极化,动脉粥样硬化

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